[00127196]广西规模化养殖奶水牛原料乳中微生物多样性的系统性分析

水牛乳作为我国南方地区的一种特色优势乳品,几乎含有人体所需所有营养元素及微量元素,且其干物质、乳脂肪、乳蛋白及维生素等含量全面高于黑白花奶牛,乳脂肪和乳蛋白分别是荷斯坦奶牛的2.48和1.49倍,在民间享有“奶中之王”的美誉,被认为是营养最为均衡的全价食品。 该课题采用16S rRNA高通量测序技术,对水牛研究所种畜场存栏的纯种印度摩拉水牛、巴基斯坦尼里/拉菲水牛及本所培育的三品高代杂水牛（摩拉×尼里-拉菲×本地沼泽型）生鲜乳中细菌群落组成和结构进行比较分析,结果显示：3品种样本共注释出1223个OTUs,分属于19个细菌门,其中变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）为其共有的优势菌门。在属水平上对丰度≥ 0.01 %的物种求和,3组样本共得到72个细菌属,其中金黄杆菌属（Chryseobacterium）、不动杆菌属（Acinetobacter）、乳球菌属（Lactococcus）、假单胞菌属（Pseusomonas）、链球菌属（Streptococcus）以及肠杆菌属（Enterobacter）为3品种共有优势菌属。相较而言,摩拉水牛乳样本的细菌多样性最丰富,尼里其次,三品杂最少,摩拉品种与尼里/拉菲水牛乳所含菌群差异较大,与三品杂差异较小。同样,课题对水牛初乳与常乳组样本中的细菌组成及多样性进行了比较分析,结果显示,两组样本共注释到1176个OUT,26个细菌门,97个目,197个科,495个属和767个种。其中初乳组样本共得到292个细菌属和437个细菌种。初乳组较常乳组细菌多样性丰富。且两组样本组内差异较小,组间差异显著,各样本优势菌群和丰度差异较大。 通过对健康和患乳房炎奶水牛原料乳中微生物菌群结构及多样性分析,结果显示：尼里·拉菲水牛乳房炎和健康组原料乳共有细菌属为（Delftia）戴尔福特菌属、（Stenotrophomonas）黄单胞菌属及（Deinococcus）奇异球菌属。乳房炎组优势菌群为（Delftia）戴尔福特菌属、（Stenotrophomonas）黄单胞菌属、（Deinococcus）奇异球菌属、（Chryseobacterium）金黄杆菌属、（Streptococcus）链球菌。乳房炎组shannon、simpson指数均显著低于健康组（P＜0.05）,说明乳房炎生乳中微生物多样性低于健康组。另乳房炎组中检测出了（Staphylococcus）葡萄球菌属,而健康组未检测出。课题研究冬夏两季水牛乳中的细菌多样性,结果显示：冬季组样本共得到19个细菌门, 456个属和733个种。而夏季组样本共得到14个门,274个属和424个种,相较而言,冬季组的细菌多样性显著高于夏季组。两组样本优势菌群组成及丰度差异显著,组内差异小,组间差异大。随着气温升高,夏季组中的乳球菌属（Lactococcus）、金黄杆菌属（Chryseobacterium）占优势,而气温下降后,冬季组中的芽孢杆菌属（Bacillus）、库特氏菌属（Kurthia）和土地杆菌属（Pedobacter）则成为优势菌群,这说明水牛乳中细菌多样性与季节气候因素密切相关。同时,课题也分析了生鲜水牛乳从刚挤出至加工前（4℃分别冷藏5h、12h、24h）微生物群落结构及其动态变化,从刚挤出至冷藏24 h内,生鲜水牛乳中的微生物多样性和丰富度一直呈动态变化。刚挤出组（30min内）样本共注释出14个门, 283个属和435个种,冷藏5 h组样本共得到16个门, 306个属和470个种,冷藏12 h组共得到18个门,423个属和662个种,冷藏24 h组样本共得到15个门, 336个属和524个种,由此可知,冷藏12 h组的细菌多样性显著高于其它组。刚挤组与冷藏组组间菌落差异较显著。冷藏时间不同,样本中主要菌属丰度差异较大,刚挤出～冷藏5 h组中的优势菌属为金黄杆菌属（Chryseobacterium）、巨型球菌属（Macrococcus）、乳球菌属（Lactococcus）,而冷藏12 h～冷藏24 h组中的优势菌属则为不动杆菌属（Acinetobacter）、芽孢杆菌属（Bacillus）、库特氏菌属（Kurthia）。葡萄球菌属（Staphylococcus）在刚挤出组样本内未检出,在冷藏5 h组样本有低丰度检出,且随着冷藏时间的延长,其丰度呈上升趋势。 通过课题的开展,为后期水牛原料乳品质的控制、水牛乳深加工、优良菌株的筛选以及奶水牛乳房炎的前期预警等提供了技术支持。