[00127830]云南少数民族地区亚洲带绦虫流行状况、影响因素及其生物多态性研究

本课题对云南26个县、市14个民族带绦虫的感染现状进行了流行病学研究,对采自云南各地的带绦虫标本进行了多基因片段遗传标记多态性分析,结果显示（1）云南存在猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲绦虫的流行,三种带绦虫分布区域不一,但均为少数民族积聚地区,流行较为严重的是兰坪、香格里拉、大理、鹤庆、洱源、武定、元谋、景洪、沧源、龙陵、施甸、普洱,以兰坪普米族感染率最高为48.75%,与其喜生食生内脏有直接关系,其次是喜食生肉、半生烤肉等习俗的大理白族、保山彝族、布朗族、楚雄傈僳族、苗族、版纳傣族,其它民族均有散发病例,《居民生活饮食习惯调查表》《肠道寄生虫流行调查表》数据统计分析进一步揭示了带绦虫在少数民族地区流行与其特有生活饮食习惯有有明显相关性（2）云南兰坪、香格里拉、大理、洱源、龙陵、施甸存在亚洲带绦虫流行,在研究中还显示兰坪、香格里拉、大理、洱源亚洲带绦虫是主要流行虫种,为当地流行的优势种。（3）流行病学调查显示囊虫病较高的兰坪、洱源、鹤庆的带绦虫感染者通过《居民生活饮食习惯调查表》《肠道寄生虫流行调查表》数据X 2分析,Regression线性回归分析,实验室亚洲带绦虫感染动物模型研究工作,初步提示当地的亚洲带绦虫的流行与囊虫病的发生无明显关联性。 鉴于在云南争议较大的是亚洲带绦虫的存在与分布,所以虫种的遗传标记技术路线设计为每一个区域的带绦虫的头节和成节进行盐酸卡红染色,孕节进行孔雀绿染色,进行形态学鉴定,与猪带绦虫和传统牛带绦虫比较,初步判断带绦虫的种类后,筛选出疑似亚洲带绦虫标本扩增不同基因片段,并做序列测定;结合GenBank中已知的猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫对应序列,经DNA MAN软件处理后计算遗传距离并构建系统发育树状图。检测结果一致才下鉴定结论。排出了实验干扰因素误差,提高了虫种分类鉴定的准确性。 探索了PCR-RAPD、LAMP、多重PCR（Multiplex PCR）扩增技术在mtCOXⅠ、rDNA-ITS1、rDNA-ITS2、mtDNA-12S rRNA、mtDNA-ND1及mtDNA-Cytb、HDP2 等7个基因片段中的应用,均可以筛选出特异的基因片段,在云南带绦虫的遗传多态性研究中具有可行性。其中mtDNA-12S rRNA、mtDNA-ND1基因序列为首次应用。 为探索遗传多态性研究中可应用性的优势基因片段,对HDP2基因序列与mtDNA-12S rRNA、mtDNA-ND1、ITS1、ITS2基因序列中的碱基变异率、A+T含量进行遗传多态性比较分析研究,mtDNA-ND1部分基因和ITS1基因序列在带绦虫遗传多态性研究中显示出优越性。 改良了碱变性法直接提取基因,为提高带绦虫mtDNA基因组的浓度、纯度。