[00128172]miR-187-5p调节细胞凋亡及增殖研究

急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia,ALL）是起源于淋巴系统的一种恶性血液肿瘤。近年来,伴随着很多急性淋巴性白血病的致病基因的发现和研究,急性淋巴性白血病患者的生存率也获得了提高。成人急性淋巴性白血病患者的CR率为75%-89%,其3-5年的长期无病生存率相当低,仅约为40%。尤其在急性淋巴细胞白血病患者中的复发率相当高,预后也很差。急性淋巴性白血病的病因与发病机理至今仍未完全清楚,更先进的治疗方案及诊断方法有赖于对病理机制的深入的研究。目前已经公认急性淋巴性白血病是多基因参与形成复杂的生物网络共同作用的结果,其中miRNA等非编码RNA对基因表达的调控是其复杂生物网络中的重要组成部分。因此,以miRNA调控网络为切入点,从系统水平研究急性白血病的发病机理和过程,为其预防和治疗提供新的生物靶标具有非常重要的理论意义和迫切的现实意义。 miRNAs是一类存在于真核细胞中的非编码小RNA分子,其长度约为21～23个核苷酸,可在转录后水平负向调控基因表达。miRNA在进化上非常保守,它通过碱基配对的方式结合到靶mRNA的3’UTR上,从而抑制其翻译,或直接使mRNA降解。目前,在最新版的miRBase数据库中,人已知miRNA序列已超过1000条。miRNA的表达具有组织特异性和时空特异性,并能精确的调控基因的表达。大量的研究表明,miRNA分子在生物体个体发育、组织分化、细胞凋亡、脂类代谢和激素分泌等多种生理过程发挥了重要的作用,同时也参与了以及白血病、前列腺癌、肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的病理过程。因此,对miRNA的深入研究必将有利我们了解生命现象的本质,解释细胞的行为和复杂疾病的发生机制,并进一步为疾病的诊断和治疗提供新的方向。 本研究采用生物信息学和实验验证相结合的方法,尝试从microRNA（miRNA）和转录fel子（transcri ptionfactor,TF）的共调控角度,来探讨这些ALL相关基因及其调控因子在淋巴细胞恶性转变及无限增殖中的作用机理。在所有患者的转录谱中,我们鉴定的miR-187-5p在所有的ALL患者中都高度表达。我们进一步通过Real-Time PCR实验、细胞培养及转染、MTT实验、Colony formation（集落形成）实验、Western blot 蛋白电泳实验、ELISA（酶联免疫吸附）试验、荧光素酶报告基因活性检测证明miR-187-5p促进NALM-6细胞增殖和抑制细胞凋亡,进一步研究miR-187-5p通过靶定并下调DKK2而导致的Wnt/β-catenin信号通路的激活,调控细胞增殖及凋亡。