[00128612]血吸虫的免疫原性及抗血吸虫药物体外作用研究

该研究使用重组表达技术制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原。根据日本血吸虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成一对引物，扩增SjMP10 DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中，转化BL21(DE3)后，诱导表达谷胱甘肽转移酶－虫卵中毛蚴抗原10（GST-SjMP10）融合蛋白。采用洗脱法制备GST-SjMP10融合蛋白，应用免疫印迹法和淋巴细胞增殖实验进行重组蛋白的抗原性分析。结果，SjMP10基因克隆到表达质粒pGEX-4T-3后，经异丙基-B-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导能表达出Mr 39 000的GST-SjMP10融合蛋白，经电洗脱法纯化的上述重组融合蛋白可被血吸虫感染兔血清所识别，并能刺激血吸虫感染鼠脾淋巴细胞增殖。该研究显示，日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10融合表达获得成功。　　主要创新点：　　探讨环孢素A体外抗FITC-ConA标记的曼氏血吸虫童虫的作用以及虫体表膜通透性。人工制备曼氏血吸虫童虫，使用FITC-ConA进行标记，环孢素A体外作用，荧光显微镜下观察并摄照。结果，童虫损伤或死亡，虫体逐渐从淡兰色变成亮兰色，虫体表膜严重损伤。　　再者，制备童虫，环孢素A体外作用，AF18标记，荧光显微镜观察，定量童虫荧光素的分布以及测定光漂洗后童虫荧光素的复原率。结果，童虫损伤或死亡，虫体逐渐从绿色变成黄色，虫体表面损伤；随着环孢素A剂量加大，童虫荧光素定量增加；童虫经光漂洗后荧光素的复原率大幅度降低。结论，环孢素A增加童虫AF18的摄取量，降低童虫荧光素的复原率，减低童虫表膜流动性，提示，表膜是药物作用的靶标。　　通过该基础应用研究，为血吸虫病的化疗和疫苗研究打下基础和提供实验依据。