[00129106]枣茎尖超低温冷冻疗法脱毒技术研究

枣（Ziziphus jujuba Mill.）原产于我国黄河流域,栽培历史悠久,是我国特有干果和经济林树种。由于枣树具有抗寒、抗旱、耐涝、耐盐碱等特点及其较高的经济价值,近年来在天津地区种植面积不断扩大。在枣生产过程中,由植原体（phytoplasma）引起的一类系统性病害--枣疯病（jujube witches’’ broom）具有毁灭性,遍布于我国的各大枣区,严重阻碍了枣树产业的发展。 超低温脱毒技术是近年来发展起来的一项用于多种植物高效率脱毒的理想方法。本实验以枣疯病发病组织为供试材料, 利用nested-PCR法分析春季新生枝叶中枣疯病植原体的积累情况,结果显示发病丛枝春季可以部分萌发,初期含有植原体,轻度发病植株植原体分布不均匀,主要分布在发病枝和相邻部位。重度发病植株整株各部位枝条均可带毒,植原体检出时间与距离发病枝条长度相关。针对叶片结构组织分析发现,枣疯病植原体侵染导致叶片结构发育受到抑制,叶片厚度、角质层和表皮细胞变薄,薄壁组织细胞显著减少,叶脉组织排列紊乱,形成层和薄壁细胞明显变形和减少,厚角细胞和晶体分泌细胞明显减少。从组织结构方面分析枣疯病植原体的病害发生规律和致病机理提供依据。 本研究利用茎尖组织培养技术和超低温脱毒技术对枣茎尖进行离体培养和脱毒等方法的研制。结果表明从春天水培枝条以及自然萌发枝条作为培养材料均可获得生长良好的茎尖无菌苗,枣茎尖在含有2 mol/L 6-BA和0.2 mol/L NAA的培养基上培养状况较好,运用超低温脱毒技术对茎尖组织的脱毒,对预培养、装载、玻璃化处理、超低温处理、解冻以及恢复培养等步骤进行条件筛选和优化,获得了3株再生植株,但是再生率不足1%,效果不太理想,超低温处理后植株恢复培养条件仍需改进。超低温脱毒技术具有操作简单、脱毒效率高等特点,如能成功的将此技术运用到枣疯病的防治上,可为今后枣疯病的控制和研究奠定重要基础。 在超低温脱毒研究中做了近800个外植体,茎尖组织培养较为成功,污染少,在最适培养基上枣的生长较好,但是在超低温处理阶段由于涉及到的步骤较多,在条件摸索阶段走了不少弯路,污染较多,成活率很低,导致死亡的主要原因是解冻后恢复培养阶段茎尖褐化较为严重,由于时间原因还未进行解除褐化的研究,计划在恢复培养基添加活性炭、维生素C、香蕉提取液等抗氧化物质,抑制褐化,提高超低温处理后茎尖成活率。