[00129537]龙眼叶中多成分的含量测定方法

一、课题来源与背景 1.课题来源为国家自然科学基金项目（基于构效关系和谱效关系联合研究龙眼叶抗2型糖尿病药效物质基础,立项编号：81560691）。 2.立项背景：龙眼叶是龙眼（Dimocarpus longan Lour.）树的叶子或嫩芽,其性味甘、淡、平,具发表清热、利湿解毒之功效。主要用于治疗感冒发热、疟疾、疔疮、湿疹等。前期研究表明,龙眼叶中含有黄酮类、多酚类、挥发油、鞣质、有机酸等多种化学成分。本研究采用HPLC 法同时测定龙眼叶药材中没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚 5 种成分的含量,并用综合评分法结合正交试验设计优选出最佳提取工艺,同时比较广西10个不同产地的龙眼叶样品中这5种成分的含量差异,以期更全面深入地评价龙眼叶药材,为龙眼叶药材的内在质量控制提供参考。 二、技术原理及性能指标 技术原理：本研究对龙眼叶进行质量控制,采用HPLC法同时测定龙眼叶中的没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚的含量,并采用正交设计法,以甲醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,多指标加权综合评分法进行数据分析。提供了一种高效、准确,分离度好,重复性好,稳定性好,简单易操作的龙眼叶中多成分的含量测定方法。 性能指标： 1. 供试品溶液制备：取龙眼叶粗粉,加入体积比为8:1 的甲醇-盐酸的混合溶液,超声提取40-60min,滤过,取续滤液于离心管离心,取上清液备用。 2. 对照品溶液制备：精密称取没食子酸乙酯对照品、紫云英苷对照品、槲皮素对照品、木犀草素对照品、和山柰酚对照品,加甲醇制成每1ml含没食子酸乙酯4.0mg、紫云英苷0.1mg、槲皮素4.0mg、木犀草素0.1mg、山柰酚0.8mg的混合对照品溶液。 3. 色谱条件：色谱柱：Kromasil C18柱,4.6 mm×250mm,粒度5μm;检测波长：280nm,25min转360nm;流动相：流动相A为甲醇,流动相B 为0.2%磷酸,梯度洗脱程序为：0～20min,15%→40%A,20～50min,40%→70%A;流速：1 ml/min;柱温：30℃。 4. 测定：在色谱条件下,分别进混合对照品溶液、供试品溶液各10μl,以保留时间定性,以峰面积定量。 5. 单因素考察：分别对提取方式、提取溶剂、进行考察,结果表明甲醇:盐酸（8:1）超声提取龙眼叶各成分含量较高。 6. 正交试验优化：选取甲醇浓度、料液比、提取时间三个因素为考察因素,每个因素各取3个水平,在平行操作条件下,采用L9 （34）正交试验,以没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚的含量为评价指标。 7. 通过正交试验的极差分析,各因素对龙眼叶中的没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚的影响因素大小顺序为：甲醇浓度＞料液比＞提取时间,方差分析结果表明,甲醇浓度对提取各成分有显著影响（P＜0.05）,料液比、提取时间无影响（ P ＞0.05）。确定提取工艺为：用100%甲醇:盐酸（8:1）溶液,料液比为1:5,提取50min。 三、技术的创造性与先进性 1. 本研究首次采用超声提取,在单因素试验结果的基础上,采用正交试验方法,选取甲醇浓度、料液比、提取时间三个因素作为考察因素,以没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚的含量为评价指标,建立了龙眼叶多成分的含量测定方法。 2. 一种龙眼叶中多成分的含量测定方法,采用的是高效液相色谱法同时测定龙眼叶中的没食子酸乙酯、紫云英苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚的含量,该方法具有高效、准确,分离度好,重复性好,稳定性好,简单易操作等优点,可实现对龙眼叶质量的有效控制。 3. 本项目为社会培养中药学方面高层次人才作出贡献,培养硕士研究生1名。 四、技术的成熟程度,适用范围和安全性 本项目技术方法十分成熟,研究成果可以在国内外推广应用。本项目应用的技术路线切实可行,数据可靠,实验方法安全稳定。可适用于医药、制药、科研、卫生等领域。 五、应用情况及存在的问题 1. 本项目研究成果已作学术会议交流,可以在国内外推广应用。 2. 本项目研究内容公开发表学术论文1篇,获得国家发明专利授权1项。 3. 应尽快把该成果应用于中药新药研究与开发。 六、历年获奖情况 无。