本发明提供了一种菌物孢子萌发载膜及其制作方法,所述载膜的组成物为琼脂、水溶性无机盐、吐温-20、水。将各组成物热溶冷却后摊成均匀薄层,在室温下凝固即,本发明制作的载膜较薄,不易破碎,孢子悬浮液能方便在其上铺展成较薄液层,故透光性好不影响菌物孢子萌发状态的观察,适宜作为各种菌物孢子配制成悬浮液后进行萌发试验的悬浮液载物,且制作简单、使用方便。本发明制作的载膜可满足孢子萌发需氧要求高的菌物,孢子萌发整齐,透光性好、不影响菌物孢子萌发状态的观察;且具有制作方法简单、使用方便、制作过程和制成品对操作者和试验环境安全、易保存等优点。