[00130050]利用细胞凋亡Caspase信号通路提高猪繁殖与呼吸综合征病毒体外培养滴度的研究

由于猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在增殖时会引起细胞凋亡,疫苗生产培养病毒时不易得到高滴度的病毒液,从而造成该疫苗的生产成本居高不下,本研究的目的是探索一条提高PRRSV产量的新路,为疫苗生产服务。 本项目按照抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒引发细胞凋亡的技术路线,针对主要的凋亡信号通路,选取3种Caspases广谱抑制剂和Caspases-8、Caspases-9特异性抑制剂Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHD-FMK,观察其对培养病毒TCID50的影响,结果发现Z-IETD-FMK对PRRSV增值的效果最好,能显著减少凋亡细胞数量,提高TCID50滴度。进一步试验确定了其使用浓度和加入时间。在最佳的使用浓度和加入时间下,Caspases-8的抑制剂Z-IETD-FMK可大幅度提高病毒TCID50滴度,其平均值1010.16TCID50/0.1mL明显高于对照组的105.0TCID50/0.1mL,与对照组比较差异极显著（P＜0.01）。说明通过调控凋亡信号通路,抑制细胞凋亡,达到提高猪繁殖与呼吸综合征病毒产量是可行的。如能将这一技术应用到疫苗生产中,对提高产品质量,降低成本,意义重大。 采用定量PCR技术在接种猪繁殖与呼吸综合征病毒的Marc-145细胞上检测与凋亡相关基因：促凋亡因子Bax和caspase依赖的脱氧核糖核酸酶（CAD）的抑制剂ICAD复制变化情况,结果显示,抑制剂使Bax的复制水平降低,而ICAD则升高,这与细胞凋亡减少是相对应的,说明Z-IETD-FMK对猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的细胞凋亡的调控与Bax和caspase有关,但其机制有待更多的试验证实。