[00130548]橡胶树NAD(P)H氧化酶基因克隆及其调控元件研究
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技术详细介绍
橡胶树死皮病为一严重的生理性病害，其成因十分复杂，迄今为止仍没有得到圆满的解决。随着近年来分子生物学理论和相关基因工程技术在橡胶树生理生化研究上的应用，尤其是胶乳原位凝固因子Hevein 基因hevl 的克隆，NAD（P）H 氧化酶的分离纯化及在黄色体膜上的定位，橡胶树死皮病的成因已初现端倪。在死皮树中，胶乳中能产生有毒活性氧的NAD(P)H 氧化酶活性增强，活性氧氧化黄色体膜上的类脂，最终引起黄色体膜破裂而死皮。主要研究结果慨述如下：根据基因文库的BLAST 分析，比较了106 种植物的NADPH 基因的结构特点。从这些基因的比较保守的区域，合成引物， 通过RT-PCR，首先获得了4 条cDNA 片段。Blast 分析，这4 条片段均为未知基因。然后从这四条片段中的两端设计引物，通过巢式PCR， 分离得到1300bp，1700bp，2000bp的带。序列分析和阅读筐架分析，这三条带还不是完整的基因全长序列，还必须继续进行5 端cDNA移步。同时我们分离了拟南芥植物的NAD(P)H 基因，已构建了植物表达载体。
