[00130696]瑶药小钻抗类风湿关节炎活性成分基于NF-kB信号通路的筛选和分子机制研究

以 NF-κ B为靶点的抑制剂已成为抗类风湿关节炎的新研究方向。信号转导和核转录因子（NF-κ B）是调控类风湿性关节炎发生、发展中相关细胞因子激活的“总开关”。在课题组前期发现瑶药小钻的乙酸乙酯部位具有显著的抗炎镇痛作用,能下调CIA大鼠踝关节滑膜组织NF-κ B的表达和活性的基础上,本项目整合中药化学、中药药理及分子生物学等相关方法,对小钻活性部位的化学成分进行系统的分离和结构鉴定;以NF-κ B为靶点,利用人胚肾成纤维细胞、巨噬细胞模型及基因分析手段对其化学成分进行活性评估;对活性显著的化合物进行足量制备,采用CIA小鼠模型进一步确定具有抑制NF-κB的抗类风湿关节炎活性成分。 本项目从小钻乙酸乙酯提取物中共分离得到了15个化合物,其中有2个为新化合物、5个为从小钻中首次分离得到的化合物。体内药效学研究发现,小钻乙酸乙酯提取物具有显著的抗类风湿关节炎作用,能下调CIA大鼠踝关节滑膜组织NF-κB的表达。基于NF-κB信号通路进一步对小钻分离得到的化合物进行抗类风湿关节炎研究发现,小钻化合物安五脂素和戈米辛R能抑制LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、NO的分泌,抑制TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,上调IκB-α蛋白和下调 NF-κBp65 蛋白的表达。本项目建立了小钻药材的质量标准,对小钻性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、灰分、浸出物进行系统研究,并以其主要活性成分之一戈米辛R作为指标成分进行含量测定。本项目还考察了瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞（人乳腺癌细胞MCF-7、人结直肠癌细胞LOVO、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16）增殖的影响,发现小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞具有一定的增殖抑制作用。本项目阐明了小钻抗类风湿关节炎药效物质基础及作用机制,为发现以NF-κB为靶点治疗类风湿关节炎的小分子化合物提供理论和实验依据,为该民族药物的开发奠定科学基础。