[00131765]弓形虫表面抗原基因SAG1与SAG3克隆、表达

弓形虫（Toxoplasma gondii）是世界性分布的专性细胞内寄生原虫，可感染人类和几乎各类哺乳动物，所致弓形虫病流行广泛。先天性弓形虫病较为严重，常导致严重孕妇流产、死胎或畸形等，先天婴儿感染者常导致严重疾病及死亡。此外，弓形虫也可引起禽畜疾病，给畜牧业，尤其猪、牛饲养业带来了严重经济损失。因此，研制安全有效疫苗对控制弓形虫感染和优生优育具有重要意义。该课题采用PCR技术首次从我国弓形虫RH、ZS1、ZS2株基因组DNA中特意扩增出SAG3基因，并成功构建了真核重组表达质粒：pcSAG1、pcSAG3、PEGFP-SAG1、pEGFP-SAG3；原核重组表达质粒：pGEX-SAG3；复合真核重组表达质粒：pcSAG3-SAG3，为弓形虫病疫苗的研究奠定了基础。首次用原核重组表达质粒pGEX-SAG3在E.coli中进行表达；将PcSAG3和PEGFP-SAG3转染COS-7细胞，并进行瞬时表达和稳定表达。不仅建立了稳定分泌SAG3抗原的COS-7细胞系，而且也成功地表达出具有免疫活性的融合蛋白，为进一步研究其侵入机制及免疫特性的研究创造了条件。首次将含有目的的基因重组质粒按一定比例直接免疫BALB/c小鼠，通过相关的免疫指标的检测，观察并检测其所诱导的小鼠体液及细胞免疫。结果显示：含有SAG3、SAG3/SAG1及SAG3+SAG1基因，上述基因与含有IL-2和IF-γ组合，DNA免疫皆可诱导小鼠产生免疫应答，促进IL-2、IFN-γ和IL-12等的产生，延长RH株弓形虫对小鼠攻击感染的存活时间。说明其具有一定程度抗弓形虫感染的保护性免疫力，且与细胞因子结合皆具有加强其免疫作用。进一步揭示了SAG3与SAG1基因免疫效果基本相同。首次通过流式细胞术多免疫鼠的血液进行了NK细胞、MHCⅠ、MHC Ⅱ和T细胞亚群等的研究，为下一步弓形虫疫苗的免疫功能研究提供了理论依据。存在问题及改进意见：今后进一步对免疫鼠进行细胞凋亡的研究，加强研究力度，使弓形虫疫苗及早应用于临床。