[00132354]A-FABP和PTEN参与2型糖尿病发病的分子机制及临床意义

主要内容：通过基础及临床研究探讨A-FABP和PTEN在胰岛素PI3k-Akt信号传导通路中的相互作用及其与T2DM发病的相关性。 1、观察A-FABP对胰岛素信号传导通路的负性调控因子PTEN的影响。 2、研究A-FABP及PTEN在健康人、糖尿病前期及初发2型糖尿病（T2DM）患者外周血中蛋白浓度的变化。 3、寻找一种可以调节3T3-L1细胞内A-FABP mRNA及蛋白表达的miRNA。 主要技术： 1、采用SiRNA干扰技术抑制3T3-L1前细胞中A-FABP的表达,通过荧光定量P和Western Blot法观察A-FABP对PTEN和P-Akt表达的影响。结果显示：①在未分化的3T3-L1前脂肪细胞中及其诱导分化过程中干扰A-FABP的基因表达均可显著增加PTEN的基因表达; ②在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中当A-FABP的表达减少时,PTEN蛋白的表达明显增加、而P-Akt的蛋白表达减少。 2、通过建立2型糖尿病大鼠模型,采用荧光定量P方法检测大鼠肝脏、肌肉及脂肪组织中A-FABP和PTEN的基因表达水平,并做相关性分析。结果显示;①A-FABP及PTEN在2型糖尿病大鼠脂肪、肝脏及肌肉组织中基因表达均明显高于正常对照组;②在2型糖尿病大鼠脂肪组织中A-FABP与PTEN的基因表达呈正相关;肌肉及肝脏组织中两者的基因表达无明显相关性。 3、收集初发2型糖尿病患者共65例、糖调节受损患者32例及正常对照组30例,采集外周血,观察A-FABP及PTEN在健康人、糖尿病前期及初发2型糖尿病患者外周血中蛋白浓度的变化。研究显示：糖调节受损组、糖尿病肥胖组及糖尿病非肥胖组血浆FABP4水平均显著高于正常对照组;糖调节受损组及2型糖尿病组肥胖组FABP4与PTEN的基因表达都呈正相关。 4、通过miRNA靶标预测软件,预测到mir-142-3p可能与FABP4 mRNA特异性结合,调节3T3-L1细胞内A-FABP mRNA及蛋白表达。运用光定量P法检测成熟脂肪细胞内mir-142-3p的变化进一步构建mir-142-3p质粒并扩增,用高表达质粒转染3T3L1细胞,通过油红O染色观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化的影响、通过荧光定量P观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化过程中细胞内A-FABP、PTEN mRNA的影响。Western Blot法观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化过程中细胞内A-FABP、PTEN、AKT、ERK蛋白水平的影响。 结论：（1） 在正常脂肪细胞分化过程中抑制P表达可能同时影响细胞内PI3K/AKT及MAPK/ERK两条胰岛素信号通路。 正常脂肪细胞分化过程中A-FABP的表达减少时,PTEN的表达增加。（2） A-FABP和PTEN有可能成为2型糖尿病发病及进展的预测指标,两者之间存在正相关。（3）在细胞分化过程中,mir-142-3p高表达可使A-FABP mRNA的表达明显被抑制,有可能可成为2型糖尿病新的治疗靶点。