[00132477]多重耐药病原菌临床感染潜在危险性研究

技术原理： 1.中国腹泻患者的病原学及耐药性研究。了解腹泻病原菌分布特征,为采取正确的控制疾病的干预措施提供科学依据。包括： （1）三二〇一医院腹泻患者病原菌流行病学研究; （2）河南省腹泻患者菌群流行病学研究。 2.医院和社区常见多重耐药菌的耐药性和耐药机制研究。包括： （1）ESBLs大肠埃希菌所致社区获得性血流感染研究：收集51例产ESBLs大肠埃希菌血流感染病例和菌株;采用K-B纸片法进行19种抗菌药物的药敏、ESBLs确认试验;脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行菌株同源性分析;PCR扩增测序筛选ESBLs基因型;核酸酶S1酶切包埋菌株再进行PFGE的方法评估大肠埃希菌携带质粒的数量和大小 （2）未经碳青霉烯类抗生素治疗患者中检出的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌研究：收集未使用碳青霉烯治疗的住院患者中分离的37株亚胺培南不敏感铜绿假单胞菌,采用琼脂稀释法测定了菌株对11种抗生素的敏感性,并通过肉汤稀释法测试了外排泵抑制剂 （PAβN）对亚胺培南和美罗培南耐药性的影响。通过PCR方法对金属酶编码基因及外膜孔蛋白编码基因oprD2进行了扩增和测序,用RT-PCR方法对oprD2、ampC基因的表达水平进行了测定,脉冲场电泳技术（PFGE）分析菌株的同源性。 （3）萘啶酸敏感环丙沙星耐药的鼠伤寒沙门菌的耐药性机制研究：通过噬菌体转导、基因重组、质粒转化等技术,对实验室一株药鼠伤寒沙门菌标准菌株中构建了与喹诺酮耐药机制相关的同源突变菌株,为了在同源遗传背景中对不同的喹诺酮耐药机制进行了对比和功能分析,阐明喹诺酮耐药菌株中不同耐药机制之间的相互作用关系。 3. 食用肉馅中多重耐药菌的分析及耐药研究：包括 （1）食用肉馅中CIPR-CTXR-E.coli的分布及耐药机制研究：从购买的肉馅进行CIPR-CTXR-E.coli检测、环丙沙星和头孢噻肟耐药的耐药机制研究、PFGE同源性分析及质粒分析。 （2）食用鸡肉中弯曲菌分布特征研究：把购回的整鸡,磨碎成肉馅,2小时内用营养肉汤洗涤后,接种在改良烤马亮和Preston培养基上,42+1℃微需氧环境培养弯曲菌,对培养出来的弯曲菌进行MLST分型和耐药特点研究。 （3）食用鸡中沙门菌的分布特征研究：将购回的整鸡进行沙门菌的分离培养,对沙门菌进行最大可能性分析（MPN）和血清学分析,及药物敏感试验。 4. 食源性MRSA研究：包括 （1）陕西地区猪肉源性MRSA在社区感染人群中的分布特征：采集陕西5地区猪500多只猪的鼻拭子、肛拭子;100个养饲养员的鼻拭子和肛拭子;不同超市204份猪肉馅;和猪有接触的社区患者的鼻拭子202份;留取了跟猪有接触的感染患者感染部位分离的57株MRSA;留取了2006年-2011年100株社区MRSA感染患者感染部位临床分离MRSA菌株。2008年从汉中15个养猪场141份猪鼻拭子标本中分离出13株MRSA（分别来自4个养猪场）,从猪场工人（n=13）鼻拭子中分离到2株MRSA,经MLST分型发现均属于ST9型,经spa分型后均属于spa899型。2011年对74位社区感染MRSA的患者中分离出2株ST9型MRSA。 （2）食用肉馅中MRSA的分离方法研究：12株MRSA和非MRSA在添加有2.5%、4%、6.5%、7%的NaCL的MH肉汤增菌液中进行检测评估,增菌液中添加有氨曲南、多粘菌素B、NaCL、NaN3作为选择抑制剂,在92份肉馅中增加了5株NaCL敏感的MRSA被检测出来。 与国内外同类技术比较成果的创新性与先进性： 1. 通过对汉中地区猪、饲养员、猪肉馅、和猪有接触的社区患者、和猪没有接触的社区患者的MRSA研究中,在猪、饲养员和社区患者中均找到了ST9-t899型的MRSA菌。国际上首次研究发现ST9-t899型MRSA在猪、饲养员与患者之间的传播。本课题首次在国际上对猪、猪肉馅、饲养员、与猪有接触的社区感染人群、其他社区感染人群、医院患者之间耐药菌的产生与传播进行系统研究和评估。 2. 本课题首次在国际上研究鼠伤寒沙门菌对萘啶酸敏感、氟喹诺酮耐药机制。通过转染、同源重组等技术在国际上首次证明了拓扑异构酶ParC （G78D）点突变是导致环丙沙星耐药性增加而萘啶酸耐药性降低的机制。这一机制的存在,进一步证明萘啶酸耐药性和环丙沙星耐药性应该共同作为喹诺酮类耐药机制的指标,而非如CLSI文件M100-S22推荐的单独使用萘啶酸指标。这种新耐药机制的提出可为抗喹诺酮类耐药株的抗菌药物研究提供一个新的参考标准。 3. 本课题首次在国际上报道了中国食用肉馅中检测的环丙沙星和头孢噻肟双重耐药的大肠埃希菌及耐药研究结果报道。 4. 本课题首次研究报道,氯化钠敏感的MRSA在食用肉馅中的检出。以往国际研究报道,大于2.5%的NaCL浓度会抑制MRSA的生长。我们通过在加有6.5%NaCLMH肉汤中加上氨曲南等添加剂的两步培养法,可以提高食用肉馅中MRSA的检出。 5. 首次报道了,氟喹诺酮类抗生素和三代头孢菌素的广泛使用,是未经碳青霉烯类抗生素治疗患者中检出亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的风险因素。之前国际报道,碳青霉烯类耐药株的出现和传播被认为和碳青霉烯类药物的使用有关。