[00132786]基因工程及干细胞移植治疗脊髓损伤

一、研究背景 脊髓损伤（SCI）的治疗是一直困扰医务人员的难题之一,迄今为止未取得有意义的突破,其原因是对SCI后病理生理改变缺乏有效干预手段。SCI的病理改变主要包括脊髓白质和灰质的损害,其原因为原发性损伤和随即出现的进行性的继发性损伤。继发性损伤是一个复杂的自我破坏的级联反应放大的过程, 包括原发损伤所引起的损伤局部缺血缺氧、免疫炎症反应、兴奋性毒性、自由基损伤、脂质过氧化等,是加重神经功能障碍的主要原因,具有可逆性、可调控性。因此,预防和干预继发性损伤是SCI早期治疗的核心内容。随着对SCI继发性损伤机制认识的加深,基因治疗技术的不断创新,使SCI的治疗有了新的方向和希望。 二、研究方法 本项目的总体思路是应用基因工程技术和基因干扰技术,以慢病毒和腺相关病毒作为载体,将Ngb、MSK1、HO-1基因转染至脊髓神经元或骨髓间充质干细胞（BMSCs）,体外研究调控以上基因对脊髓损伤（SCI）的作用和机制,进而通过重组病毒直接注射损伤区域或干细胞移植使以上基因在体内表达,研究以上基因对SCI继发性损伤的保护作用和机制。本项目应用基因重组技术、基因干扰技术、Real-time PCR、Western-Blot、免疫组化、免疫荧光染色、CCK-8技术、流式细胞技术、TUNEL技术、ELISA技术、激光共聚焦显微镜及透视电镜技术等多种主流实验技术,检测细胞活性和凋亡、Ngb、MSK1、HO-1、NLRP1、Bax、Bcl-2、Caspase3、细胞色素C、PCNA、hBDNF、NGF、TNF-α、IL-1β、SDF-1、VEGF等多指标的表达,并结合动物的BBB评分判断以上指标与动物神经功能恢复的影响。 三、发明点、创新点、主要贡献 本项目共发表论文14篇,其中4篇为SCI论文,总影响因子13.3分,另有5篇论文发表于CSCD核心库入选期刊,其余为中文核心期刊。 本项目旨在通过基因工程及干细胞移植技术发现治疗脊髓损伤的新方法新手段,联合临床治疗促进SCI后的神经功能恢复,其中Ngb、MSK1、HO-1基因的研究国内外未见报道（见文章1-8）,BMSCs的移植和动员研究处于国内外领先水平（见文章9-14）,,本项目运用体内外多种先进实验技术方法相结合（见文章1-14）,研究内容系统完整（见文章1-8）,且深入至机制研究（见文章1-4）,具有创新性。 四、应用推广情况 本单位自2013年起,我们已经使用本项目检验技术对200余位患者进行实验诊断,并在福建医科大学附属第二医院、福建医科大学附属第一医院泉港分院、清流县总医院推广开展,上述单位共治疗了超过80名患者。实践证明该检验技术可行稳定。 五、社会及经济效益 脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）是一种严重的神经系统疾病,其高致残率和高死亡率,不仅对患者本人及家人的身心造成严重的伤害,对社会而言,还会因生产力缺失和高额的医疗保健费用成为沉重的经济负担。本研究可以为患者脊髓损伤程度和预后的评估提供了新的判断依据,并为脊髓损伤患者的进一步治疗提供实验室依据,后期可能为SCI的治疗提供更优化的治疗方案,节约经济成本和人工成本。