[00132859]AZT协同中药砷剂As2O3对肝癌细胞侵袭转移的影响极其机制研究

1、课题来源与背景 “AZT协同中药砷剂As2O3对肝癌细胞侵袭转移的影响极其机制研究”课题是2013年甘肃省科技计划项目。肝癌发病隐匿,早期缺乏特异性的临床表现,手术切除和肝移植是唯一的治愈方法,而70%的患者到确诊时已到晚期或者发生了肝内外转移,错过了最佳手术时间,再者肝癌术后的复发转移也是目前肝癌治疗的难点之一。因此,寻找有效的手段抑制肝癌细胞的侵袭转移在抗癌治疗中具有重大意义。随着现代技术的发展,对天然植物药物化学成分的不断研究,从中药中筛选出疗效好、毒副作用小的抗肿瘤药物是目前肿瘤药物治疗研究的一个热点。很多研究表明As2O3具有抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡的作用。人们深入地研究As2O3在肝癌治疗中的效果发现,随着药物作用时间的延长以及浓度的增加,As2O3的毒副作用越来越强,因此为了实现低毒高效的理想治疗效果,As2O3的联合用药应得到重视。AZT是一种端粒酶抑制剂,能通过抑制端粒酶的活性以及肿瘤细胞端粒的复制,从而发挥抑制肿瘤细胞增殖、促其凋亡的作用。课题组前期运用协同原理研究As2O3联合AZT对肝癌HepG2细胞增殖的协同抑制作用时发现,AZT能够通过激活Caspase-3通路增加As2O3对肝癌细胞治疗的敏感性,并能有效减少As2O3的使用剂量,提示二者有协同抑制人肝癌HepG2细胞增殖的作用。因此,本项目在此基础上进一步探索两药联合抗肝癌的相关作用机制,为抗肝癌治疗提供理论依据。 2、技术原理及性能指标 本研究主要观察As2O3联合AZT对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响,在细胞水平通过划痕愈合实验,Transwell迁移和侵袭实验检测As2O3和AZT单独作用以及联合作用对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响,在分子水平上通过qPCR技术和蛋白印迹实验检测两种药物单独作用以及联合作用对相关基因表达的影响及其对ERK1/2信号通路影响的研究,从而探讨As2O3联合AZT对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭抑制的有关机制。 完成指标报括：（1）确定AZT协同As2O3对肝癌细胞粘附和侵袭的影响;（2）从分子水平阐明AZT协同As2O3抗肝癌粘附和侵袭的分子靶标;（3）研究成果对临床上肝癌的有效疗效起到积极的促进作用;（4）在国内外重要学术期刊发表学术论文2～3篇;（5）培养研究生2名; 3、技术的创造性与先进性 课题组前期运用协同原理研究As2O3联合AZT对肝癌HepG2细胞增殖的协同抑制作用时发现,AZT能够通过激活Caspase-3通路增加As2O3对肝癌细胞治疗的敏感性,并能有效减少As2O3的使用剂量,提示二者有协同抑制人肝癌HepG2细胞增殖的作用。但目前还未见As2O3联合AZT对迁移和侵袭方面的研究,因此,本研究在此基础上进一步探讨As2O3和AZT联合作用对人肝癌HepG2 细胞迁移和侵袭能力的影响,并探索两药联合抗肝癌的作用机制,旨在为将来临床联合应用As2O3和AZT提供有力的分子理论依据,为此联合方案的深入研究开发提供实验基础。 4、技术的成熟程度,适用范围和安全性 本项目技术应用了划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验、荧光定量PCR及Western blotting技术。技术比较娴熟,适用于各种肿瘤基础研究实验,安全性一般。 5、应用情况及存在的问题 1)直接经济效益和社会意义 本项目对中药及其有效成分抗肿瘤运用了先进的技术方法,从多角度、多层次、多方面展开研究,为获得中药抗肿瘤治疗规律性的认识。本项目不仅提高了中药研究的科学性、系统性,也更好地服务于临床,体现了社会效益。 )推广应用价值 本研究As2O3联合AZT作用肝癌细胞,而后通过划痕愈合实验和Transwell迁移实验证明了As2O3联合AZT能够抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。又通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹法也证实与肝癌转移侵袭相关的基因表达受抑制,从而初步探究了药物协同作用通路的表达规律,为研究As2O3联合AZT在抑制肝癌的发生和发展中的作用提供了实验依据,以便更好地服务临床。本研究成果的推广应用将为中药抗肿瘤同类研究以启迪。 3)存在的问题 本项目在认真研究过程中发现团队协作的重要性。另外,实验只局限于Transwell小室观察药物对人肝癌细胞侵袭及游走能力的影响,检测部分与肝癌转移相关基因mRNA及蛋白表达,仍需更深层次的机制探讨,及其完整的作用通路机制。需要我们用更多的实验来观察、探讨,为其治疗相关肿瘤提供更多的实验依据。