[00133068]人类白细胞抗原G (HLA-G)和表达生存素(Survivin)mRNA的游离癌细胞在常见恶性肿瘤临床应用研究

恶性肿瘤是人类主要的致死性疾病之一。目前，虽然癌症的常规治疗方法，如化疗、放疗和手术近几十年来均已有很大的改进，但仍不能治愈多数常见的恶性肿瘤。究其原因，大多数癌症病人临床诊断时已处于疾病的中晚期。因此。癌症的早期发现和早期诊断在恶性肿瘤的防治中起着非常重要的作用。但是，目前常用的肿瘤标志物其特异性较差，在良性肿瘤或其它非癌症病人也可能出现表达。大多是不能作为癌症的早期检测方法，仅能用于肿瘤病人的预后或对治疗的监测。因而，发现恶性肿瘤特异性较高的肿瘤标志物和研发更为特异敏的检测方法是当前国内外肿瘤研究趋势之一。　　存活素（survivin）和人类白细胞抗原G（HLA-G）是新近发现的恶性肿瘤特异性表达的蛋白分子。存活素是一种细胞凋亡抑制剂。细胞凋亡的抑制在癌症的发生，发展和转移的机理中起着重要的作用。HLA-G则是一种非经典Ⅰ类白细胞抗原，具有抑制宿主免疫反应的功能。宿主免疫监视失效和肿瘤细胞的免疫逃逸在癌症的发生，发展和转移的机理中同样起着重要的作用。　　据此，我们假设：表达存活素的癌细胞比不表达的癌细胞恶性程度较高，更容易发生浸润并脱离原发部位，成为血中游离癌细胞。并且这些表达存活素的游离癌细胞有可能比不表达的癌细胞更有可能在体内建立起远处转移瘤。因而，存活素的表达可能是肿瘤细胞发生转移的癌细胞本身生物学特性之一。其次，HLA-G在癌组织的异常表达是肿瘤免疫逃逸机制之一，表达HLA-G的肿瘤细胞更可能逃避宿主的免疫监视，发生浸润、脱离和转移，也可能是肿瘤细胞发生转移的癌细胞本身生物学特性之一。更进一步讲，HLA-G在恶性肿瘤细胞的表达抑制宿主的免疫反应，如果降低HLA-G表达水平，宿主免疫反应又可增强。因此，通过抑制HLA-G的表达而增强宿主的免疫应答可作为肿瘤免疫治疗的一个新方向。　　因此，本项目：　　1、建立起检测外周血中表达存活素mRNA的游离癌细胞和检测HLA-G在肿瘤表达特异敏感的方法；　　2、用这些方法检测乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌等五中常见的恶性肿瘤HLA-G的表达和外周血游离癌细胞；　　3、研究和分析HLA-G的表达和外周血游离癌细胞与临床病理指标，病人生存率或疾病复发率的相关关系；　　4、确定检测HLA-G和表达存活素mRNA游离癌细胞临床应用价值。　　研究结果显示：　　1、揭示了人类白细胞抗原G(HLA-G)的表达与乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌预后相关的临床病理指标和病人的生存率密切相关，是一个独立的预后指标。确立了HLA-G是一个有功能的，能表明宿主免疫状态的新肿瘤标志物，有可能用于乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌五种临床常见肿瘤的诊断、预后和免疫治疗的靶点。　　2、提出检测血浆可溶性HLA-G可能作为乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌五种临床常见肿瘤的临床诊断的观点。　　3、发现了采用生存素（Survivin）mRNA作为特异的肿瘤标志物检测外周血中扩散的游离癌细胞与乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌五种临床常见肿瘤预后相关的临床病理指标，疾病的复发率和生存率密切相关；是一个独立的早期预测癌症复发和预后的指标；并发现不仅在中晚期，而且在早期乳腺癌，胃癌，直－结肠癌，非小细胞肺癌和食道鳞癌病人均可检测到表达生存素mRNA的游离癌细胞。　　4、证实恶性肿瘤细胞HLA-G的表达与肿瘤组织内淋巴细胞的侵润呈负相关关系，提示HLA-G在肿瘤免疫逃逸机制中起着重要的作用。　　5、证明HLA-G在乳腺癌的表达与雌激素和孕激素受体的表达呈正相关。并证明雌激素和孕激素能增加体外培养的乳腺癌细胞株HLA-G的表达，而雌激素和孕激素的拮抗剂能抑制体外培养的乳腺癌细胞株HLA-G的表达。HLA-G的表达又抑制异体淋巴细胞毒性反应。采用抗HLA-G单克隆抗体能拮抗HLA-G对淋巴细胞毒性的作用。提示HLA-G可能作为乳腺癌免疫治疗和以抗体为基础免疫治疗的靶点。　　6、建立有中国自主产权的测定生存素表达的RT-PCR-ELISA方法；特异敏感的抗HLA-G的单克隆抗体和测定可溶性HLA-G的酶联免疫方法。