[00133458]肝癌相关miRNA及其靶基因的调控网络研究

miRNA是一类在动植物细胞中广泛表达的小分子非编码RNA，它在转录后水平发挥着调控基因表达的作用，它的异常表达与肿瘤的发生发展、甚至侵袭转移都有密切的关系。 军事医学科学院放射与辐射医学研究所的付汉江副研究员主持的市自然科学基金“miR-483的功能研究”（项目编号：5072039），该项目组通过小RNA克隆及芯片技术发现了一批新的miRNA分子以及一系列与肝癌相关的miRNA分子；并运用miRNA定量PCR技术，对miRNA在不同肝癌组织及肝癌细胞系中的表达水平进行了检测，然后采用miRNA靶基因反向筛选技术确证了这些miRNA调控的靶基因，并对它们在肝癌细胞中的功能进行了深入研究。 miR-483是该实验室新发现的一条miRNA基因，它位于类胰岛素生长因子2的第7内含子。项目组发现无论是在肝癌细胞还是肝癌组织中，miR-483与其宿主基因IGF2都是协同表达的。而在HEK293等细胞中IGF2及miR-483的表达水平并不完全一致，这说明miR-483在不同类型细胞中有着不同的表达调控方式。项目组通过基因芯片、定量PCR及Western blot检测发现，miR-483可抑制IGFBP3(IGF结合蛋白3)的表达。通过负调控IGFBP3的表达，可逆转ATRA对HepG2细胞增殖的抑制作用。　　项目组运用miRNA克隆及miRNA芯片技术对肝癌及癌旁组织的miRNA表达谱进行了大规模分析，并运用qRT-PCR技术进行验证。结果显示miR-34a、miR-101、miR-148、miR-193b及miR-195等miRNA分子在肝癌组织中显著低表达，这表明其在肝癌的发生、发展过程中可能发挥着抑癌基因的作用。 项目组运用miRNA靶基因反向筛选技术，发现miR-16及miR-195等多个miRNA分子同时调控CCND1、CCND3、CCNE1及CDK6等多个细胞周期相关基因的表达。这说明miR-16及miR-195通过同时调控多个而不是单个细胞周期相关基因的表达控制着细胞周期进程。此外，他们还发现miR-34a可调控重要癌基因c-Met、CCND1及CDK6的表达，同时具有抑制癌细胞侵袭迁移及诱导细胞周期阻滞的功能。总之，这些miRNA往往可以调控多个重要的靶基因，而一个靶基因又同时受到多个miRNA分子的调控，miRNA与其调控的靶基因形成了一个异常复杂的调控网络，共同参与肝癌的发生、发展进程。 项目组在发现miR-483及对其进行进一步研究的过程中，取得了诸多研究成果，并得到了国际同行的认可。此外，在《Nucleic Acids Research》等多个国际学术期刊上发表了一系列高水平的研究论文，这些论文已被《Science》、《Cell》、《Cancer cell》及《Molecular Cell》等国际一流期刊引用130余次，单篇最高引用达60次。