[00133511]血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3(SGK3)功能的研究

本项目2008年5月被列为黑龙江省教育厅面上项目（项目编号：11531431）。　　血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，参与离子通道、细胞增殖、细胞分化和存活的调节。目前已发现哺乳类SGK的异构酶有SGK1、SGK2和SGK3三种。SGK3是近年来新发现的一种蛋白激酶，其在哺乳动物所有组织中均有表达，但其在人类细胞中的生物学功能尚不清楚。　　本项目初步研究了SGK家族成员SGK2α和SGK3的生物学功能。我们构建了原核表达质粒PGEX-4T-3SGK2α并在大肠杆菌中诱导表达；利用亲和层析法纯化重组蛋白；以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备了抗SGK2α多克隆抗体，ELISA方法检测抗体效价阳性且具有较强的特异性。为了研究SGK2α在细胞中的功能，构建了真核表达质粒pEGFP-N1-SGK2α并瞬时转染HEK293细胞，通过激光共聚焦显微镜观察发现融合蛋白SGK2α-GFP主要定位于细胞浆，免疫共沉淀实验发现SGK2α与糖原合成激酶3β(GSK3β)存在相互作用。利用PCDNA6-V5-HisB-SGK2α质粒转染肝癌BEL7402细胞，通过细胞增殖实验发现SGK2α的过表达使BEL7402细胞生长速度减慢、细胞倍增时间延长；裸鼠成瘤实验发现，表达SGK2α的BEL7402细胞在裸鼠中的成瘤能力明显降低，而影响Wnt/β-catenin信号通路关键分子的表达可能是其抑制细胞增殖的分子机制。与SGK2α相反，本研究发现SGK3在细胞中的过表达却明显促进细胞的生长、增殖和克隆形成，但其作用的分子机制有待更深入的研究。