[00133769]牦牛与犏牛胚胎体外生产技术体系的创建及应用基础研究

牦牛是青藏高原不可替代的重要畜种，是高原人们赖以生存的主要生产和生活资料。但是，牦牛繁殖率低，生产性能低下。良种普通牛杂交改良牦牛生产的杂种一代（犏牛）具有较高的产奶和产肉性能，然而，种间杂交受胎率低，而且母犏牛的后代生产性能低。针对这些问题，由西南民族大学牵头承担，阿坝州科学技术研究院、甘孜州畜牧业科学研究所以及九龙县农牧和科技局等单位共同协作开展此项研究，取得成果：1、建立了牦牛与犏牛胚胎高效体外生产技术体系针对犏牛雄性不育，母犏牛与牦牛和普通牛回交繁殖的后代的生产性能低等问题，通过系列研究，建立了包括牦牛卵母细胞体外成熟、精子体外获能、体外受精及早期胚胎体外培养等关键技术的一整套牦牛与犏牛胚胎的高效体外生产技术。通过犏牛胚胎移植来实现犏牛繁殖犏牛，建立高效利用犏牛的新模式。2、首次建立了牦牛与犏牛早期胚胎性别鉴定技术体系为了获得期望性别的牦牛和犏牛后代，充分利用其产奶和产肉性能，以获得最大经济效益，根据牦牛SRY基因和HSL基因序列分别设计合成性别鉴定引物和内标引物，通过优化PCR反应条件，首次建立了卵裂球用量少、速度快、结果准确的牦牛与犏牛早期胚胎性别鉴定技术体系。3、初步建立了精子介导法生产牦牛转基因胚胎技术利用逆转录病毒的高效率感染和在DNA上的高度整合特性，将人的乳铁蛋白cDNA连接到逆转录病毒载体上构成重组逆转录病毒质粒载体，利用阳离子脂质体介导逆转录病毒质粒载体转染牦牛精子后，体外受精卵母细胞，结果获得了牦牛转基因胚胎，为转基因牦牛和犏牛的生产以及牦牛的转基因育种奠定了技术基础。4、牦牛与普通牛种间杂交受精生物学特性的研究为了探明牦牛种间杂交受胎率低的生物学机制，利用体外受精和免疫学的理论与技术研究发现，在体外受精条件下，牦牛与普通牛受精率和卵裂率正常，但在人工授精过程中母牦牛对奶牛精子产生免疫应答而降低了精子的受精能力。对母牦牛进行奶牛精子抗体免疫后，显著提高了受胎率。同时，还对牦牛GDF-9、ZP3、BLG、IFN-tau、FSHβ、LHB、SRY、TRO和PRLR等与繁殖相关的基因进行了研究。5、建立了高效的牦牛同期发情技术针对母牦牛繁殖率低、发情时间不集中而难以推广应用人工授精和胚胎移植等问题，通过对多种同期发情激素制剂的优化组合研究，筛选出了处理后发情率高、发情时间集中、受胎率高的牦牛同期发情方法：阴道孕酮栓+前列腺素+孕马血清促性腺激素。显著提高了牦牛的繁殖率，有效促进了牦牛人工授精工作的推广应用，也为牦牛的胚胎移植提供了技术支撑。6、对社会、经济发展和科技进步具有显著的推动作用建立的牦牛同期发情技术在川西北牦牛产区进行了推广应用，取得了显著经济效益。项目的实施，发挥了"产-学-研"的带动辐射社会功能，产生了良好的社会效应。同时，提高了研究团队的学术水平，获发明专利1项；发表论文31篇（其中，SCI检索论文9篇）；培养研究生15名，技术人员70余人。综上所述，研究成果具有很高的学术价值和推广价值，应用前景广阔。