[00134022]石斑鱼“黑身病”病原快速检测试剂盒研制及其在病害防治中的应用

一、课题来源与背景 《石斑鱼“黑身病”病原快速检测试剂盒研制及其在病害防治中的应用》（ ZDXM2015025）项目是2015年由海南省科技厅立项下达的海南省应用技术研发与示范推广专项项目,由海南省海洋与渔业科学院和中国水产科学研究院南海水产研究所共同实施。 二、技术原理与性能指标 （一）技术原理 项目针对鱼类神经坏死病毒（nervous necrosis virus,NNV）,比较不同的保存试剂和核酸提取方法对患病样品内病毒基因组数量的影响,建立待检样品的常温保存技术和简易的核酸提取方法;设计NNV特异引物,建立RT-LAMP 快速检测石斑鱼神经坏死病毒的技术,并分析其灵敏度、特异性等,确定快速检测试剂盒的制备、存贮及质控技术工艺,开发出石斑鱼NNV核酸快速检测试剂盒（恒温荧光法）产品,简化检测设备条件,适合在生产现场中应用。 （二）性能指标 1. 建立待检样品常温保存和核酸快速提取技术。2.建立石斑鱼神经坏死病毒快速检测试剂盒的制备、存贮及质控技术。 3.开发出鱼类神经坏死病毒快速检测试剂盒新产品1个。4.发表学术论文2篇;提供试剂盒600个进行推广应用,培训技术人员200多人次。 三、技术的创造性与先进性 本项目针对石斑鱼神经坏死病毒,研究了RT-LAMP快速检测NNV试剂盒的灵敏度、检测限、稳定性及保存条件,确定了制备工艺,开发出“赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV）核酸检测试剂盒（恒温荧光法）”产品,简化了检测设备条件,使其在生产现场中应用更加快速、便捷。 四、技术的成熟程度和适用范围 本项目成果已经在生产上稳定的应用,在海南琼海、文昌等几个市县进行示范应用,证明其具有快速、特异、灵敏的特点,适合在水产养殖现场作病害检测用。 五、应用情况及存在的问题 项目成功实施后,在海南省养殖石斑鱼病毒病监测及防控等方面均有明显成效。建立的RT-LAMP快速检测NNV试剂盒在海南省琼海、文昌等几个市县进行示范应用,培训技术人员200多人次,定期对石斑鱼养殖场进行抽样监测,有效的预防石斑鱼神经坏死病的暴发,为我省石斑鱼养殖生产安全提供可靠的快速检测技术。