[00135498]一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法

成 果 简 介 1 课题来源与背景 本专利由广西壮族自治区药用植物园承担,是在广西药用资源保护与遗传改良重点实验室经费资助下完成的。百合科酒瓶兰属多年生常绿小乔木状草本植物酒瓶兰是一种树势优美、特别适于热带地区绿化和美化的园林观赏植物,又因叶片中含有大量甾体皂苷而具有重要的天然药物开发价值。但繁殖上,国内不易开花不易结籽,由国外进口种子价格昂贵,扦插繁殖效率极率。因此,研究本发明所述组织培养方法,以有效快速地提高酒瓶兰种苗繁殖速度和质量,实现酒瓶兰优质种苗的工厂化育苗,满足市场需求,具有重要实践意义。 2 技术原理及性能指标 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法,基于分步分化培养的原理,即以消毒酒瓶兰种子作诱导培养无菌试管苗,再经丛生芽培养、壮苗培养和生根培养等步骤获得生根苗,然后,炼苗、移栽到大田。具体步骤及相关指标如下： （1） 外植体的选择及无菌试管苗培养：以酒瓶兰种子为外植体,经2％洗洁精水溶液浸泡5分钟,自来水冲洗15-20分钟,含2-3滴吐温-20的0.1％升汞消毒8-10分钟,无菌水冲洗3-5次,消毒滤纸去除表面水份;将步骤消毒外植体接种到MS丛芽培养基中,22-26℃,光强1500 lux,8-10小时/天,培养35天,发芽获得无菌试管苗,MS丛芽培养基：MS+GA3｜0.1-0.5 mg/L+30 mg/L蔗糖+5 mg/L琼脂,pH 6.0。 （2） 试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤（1）无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,22-26℃,光强1500lux,光照时间8-10小时/天,培养30天,得无菌试管苗丛生芽, MS繁殖培养基：MS+TDZ｜0.1-1.0 mg/L+KT｜0.1-0.5 mg/L+IBA｜0.1-1.0 mg/L+蔗糖｜30 mg/L+琼脂｜5mg/L,pH为6.0。 （3） 丛生芽壮苗培养：将步骤（2）得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,22-26℃,1500 lux,光照时间8～10小时/天,培养30天,得到健壮植株,MS壮苗培养基：MS+6-BA｜0.5-1.5 mg/L+NAA｜0.1-0.5 mg/L+蔗糖｜30 mg/L+琼脂｜5mg/L,pH为6.0; （4） 健壮植株生根培养：将步骤（3）得到的健壮植株置于1/2 MS生根培养基培养,22-26℃, 1500lux,光照时间为8～10小时/天,培养30天,得到带根完整植株,1/2MS生根培养基：MS+ NAA｜0.1-1.0 mg/L+ABT生根粉｜0.1-0.5 mg/L+蔗糖｜15 g/L+琼脂｜5 g/L,pH为6.0。 （5） 炼苗与移栽：培养基表面加入少量自来水,开瓶盖炼苗,约1周,培养基表面出现角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到沙床中,再过约1个月,移栽到大田。 3 技术的创造性与先进性 本专利利用优化的MS诱导丛芽培养基快速产生大量丛芽,再经过壮苗培养、生根培养,既可扩大繁殖系数,又能提高成活率,改进酒瓶兰的繁殖效率;各优化步骤中所用药品为常规药品。该专利的技术方案整体上具有投入少、产出高等优点,适合工业化生产。 4 技术的成熟程度、适用范围和安全性 本发明通过了多次重复试验,技术上已达到成熟,酒瓶兰的繁殖系数达23-30倍,生根和移栽成活率均在90%以上,可加酒瓶兰的繁殖效率。适用于普通植物组织培养室的植物大规模繁殖,可快速获得大量优质酒瓶兰种苗。本专利涉及的组织培养用营养液为常规药品,仅消毒用升汞为剧毒物质,但按室验管理要求操作不会造成污染,可保证大气、土壤、水分等的安全。 5 应用情况及存在的问题 本专利在广西壮族自治区药用植物园的酒瓶兰组织培养快速繁殖中得到有效利用。本专利不存在酒瓶兰快速繁殖的技术问题,可进行种苗规模化生产和产业化推广。 6 历年获奖情况 本成果为授权发明专利,暂未获得任何奖项。 7 成果简介本发明提供了一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法,即：先以消毒过的酒瓶兰种子作外植体诱导培养无菌试管苗,再经丛生芽培养、壮苗培养和生根培养专用培养分步培养获得生根苗,然后,炼苗、移栽到大田。采用本发明所述的繁殖方法得到的丛生芽增殖系数为20-30倍,获得组培苗生根率在95％以上,移栽苗床成活率在90％以上,有效解决了酒瓶兰工厂化育苗的问题。