[00135527]桉树无性系鉴定DNA指纹图谱及特异性引物开发研究

“广西亚热带作物基因组学技术平台建设－广西桉树优良无性系鉴定DNA指纹图谱及特异性引物开发研究”项目为广西区科技厅创新能力建设项目，合同编号为桂科能05112001-IC，项目经费10万元，项目实施时间为：2006年1月～2007年12月。　　我们开展该项目的研究，旨在前期桉树良种选育、无性系快繁研究工作的基础上，利用ISSR、ITS、cpDNA序列分析技术，对巨尾桉和尾叶桉优良无性系、巨尾桉和尾叶桉实生苗以及近缘种类进行特异性分子标记筛选和差异性位点分析，根据ITS和cpDNA序列变异特点以及筛选出的分辨率高和重复性好的ISSR引物构建无性系的DNA指纹图谱，以便在以后的优良无性系苗期鉴定中更加准确、快捷，有利于规范桉树苗木市场，为我区桉树林浆纸一体化产业发展起到科技支撑作用。　　项目考核指标：构建尾叶桉广林4号、巨尾桉广林5号和巨尾桉广林9号3个优良无性系的DNA指纹图谱，研究开发优良无性系的特异性引物对3个。　　已经完成的考核指标：　　1、建立了桉树3个优良无性系鉴定的ISSR指纹图谱；　　2、开发出两个叶绿体位点的DNA条形码用于桉树种间与无性系间的鉴定；　　3、将ITS序列的碱基位点差异以及ITS序列的长度差异用于桉树无性系的鉴定；　　4、撰写发表研究论文3篇。　　项目研究达到预期效果：通过叶绿体DNA的JLA区域和psbA-trnH非编码区序列的比较，可以将该研究中所有的桉树种类（包括2个无性系与巨尾桉、巨桉实生苗）区分开。因此，桉树叶绿体DNA的JLA区域和psbA-trnH基因间隔区的DNA序列可以作为桉树苗木市场的品种和种间鉴定的DNA条形码；ISSR-PCR分析可以鉴别：尾叶桉无性系（GLU-4）和巨尾桉无性系（GLGU-5，GLGU-9）；无性系与巨尾桉、尾叶桉实生苗；同时也可以区分巨尾桉实生苗与尾叶桉实生苗；ITS序列分析也可以进一步将巨尾桉3个优良无性系区分开。　　该研究的叶绿体DNA基因和核基因的ITS序列分析方法以及ISSR分析方法为鉴别桉树优良无性系提供了可靠的分子标记。　　项目的创新和特色：　　（1）将ISSR技术应用于桉树优良无性系的DNA指纹图谱构建在国内外尚属首次。　　（2）叶绿体位点的DNA条形码用于桉树种间与无性系间的鉴定在国内尚属首次。　　（3）无性系之间的ITS碱基位点差异，无性系与尾叶桉、巨尾桉之间ITS序列的长度差异，作为无性系之间以及与性状近似的巨尾桉和尾叶桉实生苗之间的鉴定依据在国内属首次。　　（4）在研究中发现三个优良无性系的原初的杂交父本或母本的ITS与巨桉、尾叶桉的ITS序列出现了明显的分化，其分化的程度甚至超过种间。3个优良无性系的ITS序列在功能区5.8S基因片段与其它的桉属种类也有较大分化，属于桉树的一种假基因。桉树假基因谱系的发现在国内属首次。