[00135589]食源性诺如病毒的遗传多样性及其分子进化机制研究

诺如病毒是全球急性胃肠炎的重要病原。丰富的遗传多样性是它广泛流行的重要原因之一,其中GII.4型是全球二十年余来的主要流行基因型。本项目以GII.4型诺如病毒为对象,实时跟踪其全球变异情况,并对我国的诺如病毒多样性进行监测,及时掌握了新型GII.4变异株的出现与流行情况;开发了诺如病毒基因组测序技术,积累了22条广州地区的不同GII.4型病毒基因组信息;开展了病毒衣壳蛋白的体外表达研究,制备了GII.4型流行株的衣壳蛋白抗体;在积累本地病毒信息基础上,结合全球的GII.4型诺如病毒序列,重构了不同流行株的进化过程;通过同源建模确定各GII.4型流行株衣壳蛋白的结构差异,计算关键位点在使用不同氨基酸时的免疫原性变化特点,构建了衣壳蛋白上主要抗原表位及其氨基酸使用情况的分子档案,探索了影响病毒衣壳蛋白结构与免疫原性的关键氨基酸位点的变异规律。 具体结果如下： ①食源性诺如病毒的遗传多样性认识。诺如病毒遗传多样性的监测是开展病毒进化研究的基础,项目在执行过程中持续对广州食源性病毒的传播流行进行监测,除GII.4-2006b及GII.4-2009流行株外,还发现了GII.4-2012、GII.17等新变异株。 ②食源性诺如病毒遗传基因组信息积累。开发了针对GII型病毒基因组的三段克隆法和针对不同基因型病毒基因组的4+1+1克隆策略,并成功获得了22条来自广州地区的不同GII.4型诺如病毒基因组信息。 ③衣壳蛋白制备与免疫原性研究。以GII.4-2006b型的广州株GZ2010-L26与GII.4-2009型的广州株GZ2010-L87为对象,通过原核表达系统,获得了病毒P蛋白并制备了这两种毒株的抗体工具。 ④食源性诺如病毒GII.4型流行株衣壳蛋白的分子进化研究。整理了全球已报道的该型别病毒衣壳蛋白序列,并通过系统发育分析重建其进化过程;对病毒衣壳蛋白进化过程中的变异位点进行比对研究,借助同源建模方法分析不同变异株衣壳蛋白结构变化以及关键位点的分布情况,考察了主要抗原表位在病毒衣壳上的组成及氨基酸使用情况,从而构建了衣壳蛋白抗原表位及氨基酸使用档案,是预测病毒进化方向的重要数据基础。 本项目已发表SCI论文6篇,授权国家发明专利2件,申请中3件。培养博士后1名,并晋升为副研究员。