[00135639]RNA介导抗性转基因植物的抗病机制及遗传规律

Northern blot 和抗病性分析表明，表达PVY-CP 基因的转基因烟草对PVY 病毒的抗病性是RNA沉默介导的。转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数成正相关，感病植株含1-2 个转基因拷贝，高度抗病植株含5-6 个转基因拷贝。高度抗病的转基因植株中大多含有转基因的串联重复序列，感病转基因植株中则不含。串联重复序列是决定RNA 介导抗性的关键。采用TAIL-PCR 的方法，初步证明T-DNA 随机插入到烟草基因组中富含A、T 碱基的部位。Kan 抗性分析表明，T1 代感病植株中转基因的分离符合单位点插入的3：1 的遗传规律；抗病植株中转基因的分离符合多位点插入的15：1 或63：1 的遗传规律。通过连续4 代转基因植株的分子杂交及抗病性分析证明了转基因及其介导的抗病性能够稳定遗传，这种抗病性与接种物的种类、接种物的剂量、接种方式、植物的发育阶段都没有关系。低温及CMV、TMV、PVX 的侵染抑制了转基因RNA 沉默，并导致转基因植株对PVY抗病性的丧失。此外，还克隆了4 个新基因（RdRP、AOX、MAPK 和NPR1），并且初步证明了转基因植株中RdRP、AOX 和MAPK 的表达水平与转基因RNA 沉默的发生呈正相关。