[00135663]血管性认知功能障碍大鼠神经突触蛋白的鉴定与分析

①课题来源与背景： 目前国内外学者研究发现Alzheimer Disease（AD）患者在出现认知功能障碍前就有神经突触数量的下降,且突触的缺失程度与痴呆严重程度呈正相关,故学者们倾向认为突触损伤是AD的始动因素之一。Schonberger等研究发现AD患者早期即有参与神经递质释放的多个突触蛋白量的变化,包括synaptotagmin、synapsin、rab3a、AP2、AP180等,最近又有实验证明在AD早期患者中参与突触入胞过程相关的突触蛋白Clathrin（网格蛋白）已经下降,已知Clathrin为神经突触入胞蛋白质,在囊泡回收的过程中,Clathrin分布在囊泡表面,介导囊泡入胞,同时可以介导神经生长因子（NGF）入胞。Clathrin在AD发病早期下降及其与NGF的关系引起了学者们的关注,因此有学者推测：各种致病因素可能通过影响Clathrin,进而影响神经生长因子的摄取,引起认知功能下降,导致痴呆的发生。 近年来慢性缺血致血管性认知障碍越来越受到人们的关注,我们前期工作中应用大鼠双侧颈总动脉永久结扎法（2VO）制备慢性前脑缺血致痴呆动物模型,并对不同时间点进行病理学、行为学等研究,发现双侧颈总动脉永久结扎可导致大鼠出现进行性的认知功能障碍;在大鼠出现认知功能变化及病理改变前确有神经突触数量的下降;突触蛋白synapsin也下降。提示突触改变在血管性认知障碍发病早期可能起了一定的作用,突触损伤可能也是血管性认知障碍的始动环节之一。理论上讲在突触病理上出现改变前应该有功能的变化,因此相关突触蛋白应该有改变。突触蛋白改变是否是血管性认知障碍发病的主要原因,除synapsin外还有哪些突触蛋白发生了改变从而影响了神经信号传导,进而导致血管性认知障碍的发生,目前尚不完全清楚。②研究目的与意义： 本研究成功复制血管性认知障碍动物模型并成功提取了突触小体,首次发现并鉴定在慢性脑缺血至血管性认知障碍大鼠不同时间点的突触小体蛋白质组学改变。从突触蛋白质角度研究血管性认知功能障碍的发病机制,从而为其发病机制的研究提供新的重要线索,也为该病的治疗提供可能的治疗靶点。本课题的研究成果可能为临床治疗血管性认知障碍及早期干预提供线索,可能会带来巨大的经济效益、社会效益,并有极高的学术价值。 ③主要论点与论据： 本研究拟在前期工作的基础上,应用差异凝胶双向电泳 （2-D DIGE）结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱 （MALDI-TOF MS）,通过高通量的蛋白质组学研究方法对慢性缺血致认知障碍大鼠突触小体进行整体研究（本内容经吉林大学图书馆查新,国内外均未见与本研究相同的文献报道,查新编号：22011509017）,初筛与认知障碍发病可能相关的差异突触蛋白,并进一步应用western blot及免疫组化验证蛋白质组学结果,去除假阳性,找出真正的差异蛋白。从突触蛋白角度研究慢性缺血致认知功能障碍的可能发病机制,并为寻找药物治疗的靶点提供有意义的线索。 ④创见与创新：突触小体是由突触前囊（轴突终末）与轴突断离而成,在断裂处轴膜融合而封闭,使突触前囊仍具有完整的结构,突触后膜依然与突触前膜相连,保持了突触间隙,相当于一个完整细胞,且包含了几乎全部参与神经递质释放的突触蛋白,其它蛋白含量很少。如能针对与认知功能密切相关的突触小体直接进行蛋白质组学研究,将会大大提高研究的特异性。本研究应用差异凝胶双向电泳 （2-D DIGE）结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱 （MALDI-TOF MS）,通过高通量的蛋白质组学研究方法对慢性缺血致认知障碍大鼠突触小体进行整体研究（本内容经吉林大学图书馆查新,国内外均未见与本研究相同的文献报道,查新编号：22011509017）,初筛与认知障碍发病可能相关的差异突触蛋白,从突触蛋白角度研究慢性缺血致认知功能障碍的可能发病机制,并为寻找药物治疗的靶点提供有意义的线索。 ⑤社会经济效益： 本课题的研究成果可能为临床治疗血管性认知障碍及早期干预提供线索,可能会带来巨大的经济效益、社会效益,并有极高的学术价值。