[00135743]一种重组蛋白P35的制备方法

课题来源与背景：无浆体是一类由蜱传播的专性胞内寄生菌,主要寄生于牛羊等反刍动物红细胞内,导致无浆体病,旧称边虫病。无浆体与人埃立克体均归类为变形菌纲、立克次氏体目（Rickettsiaies）,无浆体科（Anaplasmatacea）,无浆体属（Anaplasma）,其中羊无浆体（A. ovis）是重要的组成成员,可以引发小反刍动物的无浆体病。该病临床症状为发热、贫血、黄疸、衰弱和渐进性消瘦。血象检测表现为红细胞数量、红细胞压积和血红蛋白含量显著下降,严重感染时可以导致死亡。该病在世界各地广泛流行,在我国许多地区也时有发生,严重阻碍了畜牧业的发展,给畜牧业造成了巨大的经济损失。 研究内容：用正向引物SEQ№1,反向引物SEQ№2,以A. ovis全基因组为模板扩增出P35的基因,长度为897 bp的片段,将前述扩增片段与pGEM-T Easy Vector 连接,转化感受态DH5a大肠杆菌,筛选阳性克隆菌株送测序,鉴定正确的重组质粒命名为pGEM-P35。将测序正确的克隆菌株提取重组质粒,再将质粒pET30a和pGEM-P35分别用内切酶EcoR I和Hind Ⅲ双酶切,分别回收目的DNA片段和pET30a载体片段,在连接、转化感受态BL21（DE3）大肠杆菌,筛选阳性克隆菌株,用终浓度1 mMol/L的IPTG进行诱导表达,表达产物经纯化后得到重组蛋白,表达后的P35重组蛋白为40 KDa。 取得成果和应用情况:本次制备的重组抗原已经建立了A.ovis 间接ELISA抗体检测技术。 创见与创新：首次获得A.ovis P35重组蛋白。