[00136780]山西连翘道地性及其品质评价体系研究

1、项目研究背景,必要性,重要性 连翘是防止流感及重大传染病的常用药,近年来随着病毒感染疾病的日益泛滥,连翘药材及制剂呈现强劲增长的市场需求。山西是连翘的道地产区,山西连翘资源丰富,野生资源面积约600万亩,连翘果实蕴藏量约达1200万吨,占全国蕴藏量60%左右。但目前国内外学者对连翘的研究多集中在活性成分含量测定或GC、HPLC指纹图谱研究,较为零散。因此,对山西连翘的道地性及品质评价方法进行系统研究具有重要意义。 2、项目研究内容 本项目建立了不同产地连翘DNA指纹图谱;测定了不同产地连翘药材中的微量元素;进行了不同产地连翘挥发油主要成分分析、不同产地连翘中主要有效成分的含量比较研究、不同产地连翘药材抗菌活性及抗病毒活性的比较研究等。在研究过程中主要进行了以下几方面的工作： （1）采用RAPD技术进行连翘DNA指纹图谱等相关研究,以不同产地连药材遗传信息之间的差异,从遗传信息上对山西道地连翘药材进行鉴别和评价。 （2）采用AAS法对不同产地连翘药材中微量元素进行比较研究,从微量元素方面阐释山西连翘的道地性。 （3）采用GC法,对不同产地连翘挥发油中主要成分进行比较研究,采用HPLC法,对不同产地连翘药材中主要活性成分进行比较研究,从活性成分方面阐释山西连翘的道地性。 （4）采用K-B纸片扩散法研究不同产地连翘挥发油及水煎液的体外抗菌活性,以抑菌圈直径为评价指标,进行了不同产地连翘挥发油和水煎液的体外抗菌活性研究,从抗菌活性方面阐释山西连翘的道地性。 （5）以MDCK（狗肾）细胞为病毒宿主,比较观察不同产地连翘药材对甲型流感病毒引起的细胞病变（CPE） 的抑制作用,进行了不同产地连翘体外抗甲型流感病毒活性的研究,从抗病毒活性方面阐释山西连翘的道地性。 （6）建立了连翘药材HPLC、GC一测多评的品质评价方法。 3、国内外技术比较 由于中药材生产过程复杂,其所含化学成分及其生物活性受多种因素的制约,如品种、产地、生态环境、土壤、气候、栽培、加工等,使得中药产品的质量变异较大。道地药材是中药材在其长期复杂的系统演进过程中所形成的最高级、最优化物质形式。道地药材品质的形成是一个与外部生态环境、内部遗传变异相关的复杂系统的自适应过程,这两种因素不断影响着植物次生代谢产物化学成分的形成,最终影响药材的药效作用。连翘是防止流感及重大传染病的常用药,山西连翘资源丰富,历来被公认是连翘的道地产区。因此,从内部遗传基因和外部生态环境等方面进行山西连翘的道地性及品质评价方法系统研究,正与当前中药研究的主旨一致。 目前,从DNA遗传信息特征、主要活性成分的种类与含量、药效作用等方面开展中药材道地性研究;采用GC指纹图谱、HPLC指纹图谱及一测多评法等方法进行品质评价中药的品质,已成为国际共识。本课题从遗传信息、活性成分及药效作用等方面阐释了山西连翘的道地性,构建了包括DNA指纹图谱、GC法活性成分含量测定及指纹图谱、HPLC法活性成分含量测定及指纹图谱和一测多评等方法的山西道地连翘品质评价体系,处于该研究领域的领先水平。 4、解决的关键或共性技术及创新点 （1）关键技术 采用RAPD技术,建立了连翘DNA指纹图谱;采用GC法,对不同产地连翘挥发油中主要成分进行比较研究;采用HPLC法,对不同产地连翘药材中主要活性成分进行比较研究;采用K-B纸片扩散法研究不同产地连翘挥发油及水煎液的体外抗菌活性;以MDCK（狗肾）细胞为病毒宿主,进行了不同产地连翘体外抗甲型流感病毒活性的研究。 （2）创新点 ①本研究首次从连翘新鲜果实提取DNA,建立了连翘药材的DNA指纹图谱。 ②从DNA遗传信息特征、微量元素、多类活性成分以及体外抗菌、抗病毒活性阐释了山西连翘药材道地性。 ③构建了包括DNA指纹图谱、GC法活性成分含量测定及指纹图谱、HPLC法活性成分含量测定及指纹图谱、QAMS等方法的山西连翘品质评价体系。 5、项目推广应用情况及取得的经济社会效益 本课题构建了包括DNA指纹图谱、GC指纹图谱、HPLC指纹图谱及一测多评法等方法的山西道地连翘品质评价体系,在GAP基地种植及其产品开发中,对实现连翘药材和制剂质量的“安全、有效和可控”,以及连翘的临床应用指导具有重要意义,将产生积极的经济社会效益,将会有广阔的推广应用前景。