[00137880]靶向性长波激发双波长胞浆Ca^(2+)荧光探针STDIn

钙信号的发生是基于细胞溶质中游离Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_I)时空依赖性的变化，因此实时准确的测定胞质[Ca^(2+)]_I十分重要。由Tsien等合成的含有EGTA分析功能团的钙荧光探针fura-2、indo-1和fluo-3等因其可无损伤导入细胞且能与许多先进的荧光图像分析技术联合使用而被广泛的应用于细胞[Ca^(2+)]_I的测定。其中fluo-3因其克服了fura-2、indo-1等需在紫外区激发而引起诸多不良影响，应用最为广泛，但与Ca^(2+)结合前后却无荧光峰的位移，故而不能采用双波长比率法测定；同时细胞荧光图像分析表明，以上试剂标记细胞时不仅进入胞浆，同时也进入胞核，这样，实验检测到的Ca^(2+)荧光信号就不再单纯为胞浆Ca^(2+)信号，同对也会包含有胞核Ca^(2+)信号，有可能给真正胞浆Ca^(2+)信号的响应带来影响，特别是对于细胞群体的分析。因此，合成只进入胞浆而不进入胞核、且可长波激发、同时与Ca^(2+)结合前后有荧光峰位移的整体性能优良的钙荧光试剂是十分有意义的。鉴于此，设计合成了国内外文献迄今未见报道的新型Ca^(2+)荧光探针STDIn，研究表明：(1)STDIn为可长波激发的双波长Ca^(2+)荧光探针，其最大荧光激发波长λex=540nm，与Ca^(2+)结合后位移至420nm，最大荧光发射波长λex=610nm；(2)STDIn具有靶向性，经STDIn-AM标记后的细胞周边荧光较强，中部完全黯黑，表明STDIn只标记胞浆而不进一步穿越核膜而进入胞核，是一种真正的胞浆Ca^(2+)荧光探针，STDIn-AM该种可靶向性导入细胞胞质区域的特性将使其对胞浆[Ca^(2+)]_I的响应相对于fluo-3更准确。另外，由于其水溶性好，在胞浆内较fluo-3亦更易于负载，且对5-HT诱导的胞内[Ca^(2+)]_I变化的响应较Fluo-3更灵敏迅速。利用STDIn首次实现了对真正的胞质区域Ca^(2+)浓度动态变化的实时监测。