[00138141]几种中草药活性成分抗肿瘤研究

哥纳香醇甲是我国科学家从番荔枝科哥纳香属植物海南哥纳香根和茎皮中分离得到的一种化合物，近年发现其具有显著抗肿瘤活性；芸香苷是食物中常见的类黄酮物质，属黄酮醇类，为槲皮素衍生物。研究发现，黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗心血管疾病、免疫调节等作用。青蒿素是目前最常用的抗疟特效药，尤其是脑型疟疾和抗氯喹疟疾。研究发现青蒿素及其衍生物具有较强的抗肿瘤作用。我们利用分子生物学前沿技术，深入开展几种抗肿瘤中药活性成分研究，得到天津市科委、武警部队等的多项资助。　　①课题编号：《Goniotnol衍生物的合成及抗肿瘤活性》天津市科委003608611；《哥纳香衍生物诱导白血病细胞凋亡机制的研究》WY2003-2；《双氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体机制研究》WY2005-6《Caspase基因在芸香诱导白血病细胞凋亡中的表达》WYD2003-10。　　②研究目的与意义：　　本系列研究旨在通过哥纳香衍生物、槲皮素、青蒿素和芸香苷抗肿瘤研究，发现几种中药单体诱导肿瘤细胞增殖抑制作用机制，探讨中药单体对细胞内发生的氧化还原反应的影响，线粒体呼吸功能的改变，药物诱导肿瘤细胞凋亡过程中Caspase途径是否被激活，研究中主要通过几种中草药作用于白血病等肿瘤细胞的细胞行为学观察，基因表达变化等找到几种中草药抗肿瘤作用靶点，为开发抗肿瘤新药提供指导。研究意义在于将祖国传统中草药瑰宝应用于肿瘤化疗中，减少患者痛苦，提高生命质量。 　　③主要论点与论据：　　论点：　　中草药中某些药物活性成分可以诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖；几种中药单体诱导细胞发生凋亡过程中线粒体Cyt C途径在其中发挥重要的作用。　　论据：　　体外合成哥纳香三醇衍生物，发现37种单体均具有不同的抗肿瘤活性。药物选择哥纳香衍生物、槲皮素芸香苷、青蒿素衍生物等几种天然植物经提取、人工合成形成单体药物作用于白血病K562细胞，经锥虫蓝拒染法染色后，计数活细胞，与正常对照组相比几种中草药单体药物明显抑制细胞增殖。MTT结果显示，几种中草药单体对K562细胞的IC50值均为10～5mol/L。单细胞凝胶电泳观察药物作用后细胞出现明显的拖尾现象，说明细胞DNA出现了损伤。流式细胞仪检测，药物作用后细胞周期发生明显细胞增殖抑制改变。Hoechest33342/PI双荧光染色后，荧光显微镜下可见几种中草药单体药物处理后的白血病细胞出现明显凋亡表现，染色质凝集、出现凋亡小体，凋亡率随药物浓度的升高而升高。在几种药物诱导细胞凋亡机制研究中发现，与正常对照组比较，药物处理白血病细胞中Caspase-3酶活性明显升高。RT-PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪下明显观察到Caspase-3相应条带，产物经过序列测定与gene bank中Caspase-3基因序列一致。Western Blot检测药物处理白血病细胞后细胞色素C表达情况，发现药物作用后，在胞浆中明显观察到Cyt C的表达。　　④创见与创新；　　1.国内外首次提取、合成了哥纳香三醇等单体，筛选了37种抗肿瘤活性的哥纳香衍生物；　　2.国内外首次探讨哥纳香三醇衍生物和槲皮素芸香苷单体可诱导白血病细胞凋亡；　　3.首次提出并证实哥纳香和槲皮素芸香苷单体可通过线粒体途径诱导白血病细胞凋亡。　　⑤社会经济效益，存在的问题；　　该项研究培养了一名硕士研究生，相关研究内容参加全军生物化学与分子生物学学术研讨会受到军内专家好评。　　⑥历年获奖情况：　　哥纳香衍生物合成早期相关研究曾获2003年武警部队科技进步二等奖。