[00138171]量子点超敏荧光免疫层析检测系统的研究与应用

成果简介 科技成果名称：量子点超敏荧光免疫层析检测系统的研究与应用 完成单位：广州市微米生物科技有限公司 一、 课题来源及背景 免疫层析技术属于即时诊断（Point of Care Testing,POCT）,在医学诊断上具有非常重要的意义。当前免疫层析产品主要是基于胶体金技术而开发的,该示踪物仅一种颜色、只能单指标检测、不能共价交联、免疫标记物易脱落、颗粒粒径均一性较差、灵敏度低、定量欠准确,无法完全满足人们的检测需求。 量子点（Quantum dots,QD）是一种新型荧光材料,因其具有特殊的物理性质从而表现出优良的荧光纳米效应,与传统有机荧光物质相比具有无可比拟的优越性。它的激发光谱宽且连续分布,发射光谱窄而对称,发射光稳定性强,不易发生光漂白,通过改变粒子的尺寸和组成可获得从紫外到近红外范围内任意点的光谱, 本成果利用量子点的优越荧光特性,将其与快速简便的免疫层析技术相结合,建立集快速和定量为一体的新型检测方法,为临床提供即时定量的检测结果,不仅对于保障人们健康具有重要意义,而且具有非常广阔的市场前景。 二、技术原理及性能指标 本成果为量子点超敏荧光免疫层析检测系统,包括免疫层析卡和免疫荧光分析仪,两者配套使用,通过在电脑上的软件编程,对获得的样本实验信息在软件上进行分析管理,包括：光信号读数、标准曲线绘制、质控范围分析、各样本浓度拟合、实验分析性能评估、用户对实验信息自定义操作等。 2.1技术原理 2.1.1免疫荧光层析检测方法的建立 采用蛋白连接技术将抗体偶联到量子点荧光微球表面,形成量子点荧光标记物;分别包被和标记,进行单克隆抗体的配对筛选;探索抗体标记制备和纯化工艺,摸索抗体包被量,优化结合垫和样品垫预处理工艺等层析技术制备工艺,建立待测物质的快速定量免疫层析检测方法,制备免疫荧光层析卡。 2.1.2免疫荧光分析仪的研制 免疫荧光分析仪使用LED作为激发光源,检测时将样本加入到检测卡的加样孔,标本中的被分析物在层析 过程中形成免疫复合物。 当检测卡被插入免疫荧光分析仪中,光源照射到试卡的检测区和质控区域时,激发附着的荧光物质,发射光被收集并转化为点电信号,电信号的强弱和荧光分子数量严格相关,检测仪自动计算出待测样本中被分析物的含量。 2.2性能指标： 此平台形成两个体外诊断试剂各项检测性能指标如下： A试剂：外观整洁完整、无毛刺、无破损、无污染;膜条宽度≥2.5mm;液体移行速度不低于10mm/min;最低检出量105CFU/mL;特异性：与D族链球菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应;重复性：检测低中高三个浓度的质控品,变异系数小于15%;稳定性：检测低中高三个浓度的质控品,变异系数小于15%;临床比对试验：与金标准比较,Kappa值为0.945,一致性良好。 B试剂：外观整洁完整、无毛刺、无破损、无污染;膜条宽度≥2.5mm;液体移行速度不低于10mm/min;最低检出量30 ng/mL;特异性：与牛转铁蛋白（500μg/mL）、犬转铁蛋白（500μg/mL）,辣根过氧化物酶（500μg/mL）均无交叉反应;重复性：检测低中高三个浓度的质控品,变异系数小于15%;稳定性：检测低中高三个浓度的质控品,变异系数小于15%;临床比对试验：与金标准比较,Kappa值为0.958,一致性良好。 三、技术的创新性和先进性 本成果优选性能卓越的量子点为示踪物,研究成果综合技术居国内领先水平。 创新性如下： ①选用量子点为标记物,实现高灵敏度和多指标同步检测; ②通过优化层析制备工艺实现快速检测的高精密度; ③通过改善扫描方式和量化算法实现层析卡中目的条带荧光值的准确读取。 四、技术的成熟度,适应范围及安全性 本成果形成的部分产品已经上市,新增销售收入和新增利税达到预期目标;项目已获实用新型专利授权2件、医疗器械注册证书2件。 本成果可以用于临床医疗、家庭健康预警、海关检验检疫、环境检测和食品安全检测等多领域。 本成果为检测试剂与配套仪器,并不直接与人体接触,对人员和环境是安全的。 五、应用情况及存在问题 依据此平台,我公司目前共研发了10余项体外诊断试剂,成功应用于心血管疾病早期诊断、传染病检测、肿瘤标记物检测等临床即时诊断领域。 为了迎接未来国外同行业的挑战和竞争,适应不断变化的用户需求,项目产品仍需在技术和工艺方面进行创新、优化和改进。 另外体外诊断试剂需要获得医疗器械注册证才能在市场进行销售和推广,其注册周期比较长,需要经过注册检验、临床试验、SFDA审查和批准等漫长的过程,严重影响系列产品面市的步伐。 六、历年获奖情况 无。