[00138239]鸭传染性浆膜炎诊断技术规程

1、课题来源与背景 1)课题来源 本标准制订工作是按照吉林省质量技术监督局2015年地方标准制（修）订计划——《鸭传染性浆膜炎诊断技术》进行（计划编号DBXM082-2015）,由吉林大学食品科学与工程学院承担起草。 2)背景 吉林省水田较多,具有养鸭的天然优势,据吉林省投资促进网4月22日消息,为了让吉林好大米卖出品牌效应,鼓励农业合作社和企业大力发展绿色和有机水稻,严格规范生产技术操作规程,可采取稻田养蟹、养鸭等生态种植方式,稻鸭共栖,互生共利。 2、技术原理及性能指标 鸭传染性浆膜炎又名鸭疫里默氏杆菌病,是侵害雏鸭的一种急性败血性传染病,以全身浆膜面发生纤维素性炎症为特征,其发病率和死亡率均很高,已成为危害养鸭业的一种重要传染病。其感染率可高达90%,而死亡率常因治疗方案和时机不当增高。鸭疫里默氏杆菌为世界范围性分布,发病无季节性,并且近年来大量的具有高耐药性的菌株被不断报道出来。其血清型复杂,目前全世界已报道的血清型有21个,而且不同血清型之间没有交叉保护作用。进行病原分离时由于基层实验室条件的落后,错过了诊断时机,目前已有细菌分离鉴定和荧光抗体技术,但由于非特异性与血清型的干扰,采用上述血清学方法存在诊断的结果不一致、不准确的问题。 PCR检测方法具有特异、敏感、快速等优点已在疫病病原学诊断中得到广泛应用,成为动物疫病病原学快速诊断方法之一。 通过细菌的分离、染色进行初步鉴定,挑取可疑菌落进行动物回归试验。下载了10株鸭疫里默氏杆菌菌株16s rRNA基因的全序列（GenBank中的登陆号分别为：AY871819、AY871818、AY871822、AY871826）,经比对发现存在高度保守序列,确定所要扩增的目的核苷酸片段如下： attagatagttggtgaggtaacggctcaccaagtcaatgatctttagggggcctgagagggtgatcccccacactggtactgagacacggaccagactcctacgggaggcagcagtgaggaatattggacaatgggtgcaagcctgatccagccatcccgcgtgaaggacgacggccctatgggttgtaaacttcttttgtacagggataaacctaccctcgtgagggtagctgaaggtactgtacgaataagcaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcaagcgttatccggatttattgggtttaaagggtccgcaggcgggctagtaagtcagtggtgaaagcctacagcttaactgtagaactgccgttgatactgctagtcttgagtatagttgaggtagctggaatgagtagtgtagcggtgaaatgcatagatttactcagaacaccg 最终确定的引物序列如下： 上游引物 5’- GATTAGATAGTTGGTGAG -3’ 下游引物 5’- GGTGTTCTGAGTAATATC -3’ 收集病料进行PCR扩增,进行分子生物学鉴定,最后电泳结果与阳性对照出现相同条带,且阴性对照和空白对照无相应扩增条带即可判定为阳性,否则判定为阴性。 3、技术的创造性与先进性 目前,国内外无相关标准,本校准首次规范了诊断鸭传染性浆膜炎的有效方法,有利于养鸭业的健康发展。 4、技术的成熟程及适用范围 本技术可熟练应用于养鸭场鸭传染性浆膜炎的诊断。本技术适用于鸭传染性浆膜炎的快速诊断。 5、应用情况及存在的问题 本技术结果准确度高,适合应用于养鸭场的鸭传染性浆膜炎的诊断。需要具备相关知识的人进行操作。