[00138252]HIV1ThaiB亚型毒株的感染性克隆及其与APOBEC3G蛋白的相互作用研究

本项目属于预防医学与卫生学研究领域。针对在我国广泛流行的HIV-1ThaiB亚型毒株，以毒株的感染性克隆及其与APOBEC3G蛋白的相互作用为核心，沿着两条技术路线开展了系列研究，一是构建毒株的感染性克隆并验证其在疫苗研究中的应用效果；二是在毒株流行的地区以HIV一方阳性的夫妻和HIV感染不同进展阶段的病例为研究对象，探索毒株与APOBEC3G蛋白的相互作用及稳定APOBEC3G蛋白的抗病毒策略，研究结果丰富了对HIV-1ThaiB毒株与宿主细胞相互作用的认识、提供了实用的致病机理等相关研究的工具。　　主要研究内容包括：1）构建成功HIV-1ThaiB亚型毒株的感染性克隆，鉴定了生物学特性。通过构建DNA质粒、免疫动物及中和抗体检测，验证了其用于疫苗制备和效果评价的效果。3）制备了APOBEC3G和vif蛋白及单克隆抗体，用Ni-NTApulldown技术验证了APOBEC3G蛋白与vif的相互作用。4）以HIV-1ThaiB亚型毒株流行地区只有一方HIV阳性的夫妻和HIV感染不同进展阶段的病人为研究对象，分析APOBEC3G蛋白和HIV-1vif的基因多态性及mRNA表达水平与HIV异性性传播和疾病进展的关系，发现HIV暴露者与感染进程不同的人，APOBEC3G的mRNA水平不同，发现了APOBEC3G基因一个新的SNPs位点，确定了ThaiB毒株vif基因的多态性特征。5）以裂殖酵母为模型，确定APOBEC3G蛋白主要定位于细胞浆、UBA2结构域能够稳定APOBEC3G蛋白、减少Vif介导的APOBEC3G降解并降低包装病毒的感染性。6）利用蛋白质组学方法，分析了MT4细胞感染HIV前后的蛋白表达差异，鉴定了部分上调和下调的蛋白。　　本项目的特点：一是直接针对我国的HIV流行毒株制备感染性克隆；二是在人群水平验证APOBEC3G与HIV传播和致病的关系；三是采用多种先进的研究方法，提出了藉APOBEC3G靶点的新型抗病毒策略。本项目已经公开发表12篇论文，其中SCI收录2篇、其余均为中文核心期刊。本项目制备APOBEC3G克隆已经赠送中国科学院两个课题组使用，效果良好。感染性克隆被美国LANLHIVDatabase收录。