[00138923]外源性尿激酶抗肝纤维化作用机制及其对门脉高压

观察外源性尿激酶(uPA)对肝纤维化动物肝组织中HSC活化(α-SMA)、TIMP-1、uPA、PAI-1、TGFβ1、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达以及对PAI-1、TGFβ1mRNA表达的影响，探讨uPA对大鼠肝硬化发生发展中的作用机制及其对门脉高压的影响。采用复合致病因子四氯化碳(CCl_4)、高醇固醇、酒精喂养Wistar大鼠，复制肝硬化动物模型。动物随机分为对照组(正常饮食)，肝硬化组(复合致病因子，共6w或8w)，uPA肝硬化预防组(复合致病因子+uPA，共6w)；肝硬化组动物喂养6w后，取出8只作为uPA肝硬化处理组(致病因子+uPA，共2w)。动物分别于6w、8w乙醚麻醉后，门径脉插管，MS―2000型二道生理记录仪测定门静脉压力后，腹主动脉取血、取肝组织分别测定：赖氏法测定血浆转氨酶(AST，ALT)、固蓝B法测定血浆总胆红素(TB)；ELISA法测定血透明质酸(HA)；氯胺T法测定肝组织内羟脯氨酸(Hyp)含量；免疫组化测定α-SMA、TIMP-1、uPA、PAI-1、TGFβ1及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达；RT-PCR测定PAI-1、TGFβ1mRNA表达。检测结果，uPA肝硬化预防组血浆转氨酶(AST，ALT)、总胆红素(TB)均明显降低，血HA、肝组织内Hyp含量明显下降，α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原以及TIMP-1、TGFβ1蛋白表达明显减少，uPA蛋白表达增加，HSC活化减少，PAI-1、TGFβ1mRNA表达减少，肝硬化程度明显减轻。而uPA肝硬化处理组血HA、肝组织内Hyp含量以及α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1、TGFβ1蛋白表达均有所增加，uPA蛋白表达无明显变化，HSC活化增加，PAI-1、TGFβ1mRNA表达增加，肝硬化程度加重。肝组织α-SMA、uPA、PAI-1、TGFβ1、TIMP-1、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达以及肝组织TGFβ1、PAI-1mRNA变化在肝硬化发展过程中发挥着重要作用。　　预防使用外源性uPA可减轻肝损伤，降低血浆转氨酶、胆红素，减少HSC活化、减少TIMP-1、PAI-1蛋白表达，加速组织损伤修复，减缓肝硬化的发生。而肝硬化后期使用uPA可能会加重肝硬化的发展。该课题充实、丰富了肝纤维化(肝硬化)发生机制，为临床肝硬化的治疗以及肝纤维化的逆转提供了新的理论依据，指出临床肝纤维化逆转、肝硬化治疗新的途径。该项目的研究将极大推进对肝纤维化(肝硬化)发生机制的认识，将对肝纤维化(肝硬化)起着积极治疗作用，将可能阻止或延缓肝纤维化(肝硬化)的发生发展，有较强的理论指导意义和较强的临床实用价值。