[00139191]唑来膦酸对肺癌95D细胞增殖和侵袭抑制作用的研究

一、唑来膦酸（ZOL）是第三代含氮的杂环双膦酸盐药物,是第一个对所有类型恶性肿瘤骨转移均有广谱疗效的双磷酸盐类药物。已知ZOL可以通过抑制蛋白质异戊二烯化诱导破骨细胞凋亡、抑制破骨细胞在骨吸收部位的聚集以及减少有利于骨吸收的细胞因子和生长因子的产生,从而发挥其对抗肿瘤细胞的骨转移的作用。国内外一些临床前研究提示ZOL除了对骨吸收有抑制作用外,还可能具有直接的体内外抗肿瘤作用,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。 二、本试验通过体外培育肺癌95D细胞,MTT法药物敏感性试验检测ZOL对肺癌95D细胞增值抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期阻滞及凋亡情况,光镜及电子显微镜下观察细胞凋亡形态变化,RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测细胞增殖、转移、凋亡相关基因VEGF、MMP、ERK1/ 2、Survivin、Bcl-2和Bax及其蛋白水平的变化,Transwell侵袭小室测定细胞体外侵袭力,来检测ZOL对肺癌95D细胞增值和侵袭力的影响。 三、研究发现ZOL对体外培养的肺癌95D细胞增殖有抑制作用,同时能降低其侵袭能力,其抑制作用呈浓度、时间依赖性。在一定范围内,ZOL浓度越高,单位时间内对肿瘤细胞增值的抑制作用越明显。在确定ZOL对肺癌95D细胞作用6 天的IC50值为26.2 umol/L,并以此浓度进行后续实验的观察中发现,随着ZOL作用时间延长,细胞增殖能力减弱,流式细胞仪也观察到G1期细胞增多,G2及S期细胞减少,细胞出现相应的凋亡形态学变化。同时,随着ZOL的作用时间的延长,促细胞增值或转移的VEGF、MMP9、ERK、Bcl-2、及Survivin基因的 mRNA及蛋白表达水平出现了不同程度的下降,而促细胞凋亡的Bax基因的表达水平出现升高。另外,在采用改良的Transwell侵袭小室检测ZOL作用不同时间后95D细胞侵袭力时发现,随着时间的延长,ZOL对肿瘤细胞的侵袭抑制力逐渐加强。以上结果说明,ZOL除了能治疗肿瘤细胞骨转移引起的骨质破坏,还具有直接抗肿瘤作用,从而在肿瘤的治疗中发挥重要的作用。然而,以上的研究还只是局限在体外细胞水平,我们的动物实验模型正在构建中,期待可以提供更多理论依据并为临床治疗提供指导,为肺癌治疗提供更多的选择。