[00140798]重瓣大岩桐组培快繁技术规程

一、课题来源与背景 根据广西壮族自治区质量技术监督局“关于下达2016年第八批广西地方标准制定（修订）项目计划的通知”,《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》获立项（2016-08085）。 大岩桐（Sinningia speciosa）为苦苣苔科大岩桐属植物。原产巴西,现广泛栽培。近年来,我国引进许多杂交新品种,市场前景看好。但重瓣品种结实率低,常规的播种育苗方法无法获得大量植株,无法满足市场的需要。大岩桐的有性繁殖需温室人工授粉采种,采种量极少,成本高,且种子繁殖的后代难以保持原有的优良品性,种子繁殖具有一定的局限性。生产上多采用扦插、分球等方式进行繁殖,但扦插繁殖系数低,分球繁殖存在株型不整齐的缺点,占地面积较大,不能满足商品化生产的需要。而组织培养具有遗传性状稳定,繁殖速度快等特点,因此,组培快繁是目前重瓣大岩桐优良种苗生产的主要途径和有效方法。目前国内关于重瓣大岩桐的组培快繁研究很多,但尚未形成一个标准,我区在此方面也无相关标准的颁布。因此,制定重瓣大岩桐组培快繁技术规程具有重要意义,同时也填补了我区无大岩桐相关标准的这一空白。 二、技术原理及性能指标 1、组织培养方法 1.1 培养基 以下所有培养基均添加白砂糖30 g/L,琼脂3.5 g/L～4.0 g/L,pH值为5.8～6.0。 初代培养基配方：MS培养基; 愈伤组织分化培养基：MS培养基＋0.50 mg/L 6-BA＋1.00 mg/L IBA; 继代培养基配方：MS培养基＋0.50 mg/L 6-BA或MS培养基＋0.50 mg/L 6-BA＋1.00 mg/L IBA; 生根培养基配方：MS培养基＋1.00 mg/L～2.00 mg/L IBA或MS培养基＋2.00 mg/L IBA＋0.10 g/L活性炭。 1.2 灭菌和接种 取生长健壮、无病虫害的重瓣大岩桐植株成熟叶片或茎段,用中性洗涤剂浸泡5 min～10 min,然后在自来水下流水冲洗30 min,并用软毛刷轻轻刷洗叶片或茎段。在超净工作台上,用75％酒精浸泡5 s～10 s,用无菌水冲洗3～5遍。再用0.1％氯化汞溶液浸泡4 min～6 min,用无菌水冲洗3～5遍。将叶片切成2.0 cm×2.0 cm或茎段切成长1.5 cm～3.0 cm,接种在初代培养基上,初代培养基配方参见附录A中的A.1。 1.3 初代培养：培养基参见1.1,培养时间为10 d～15 d,培养温度为24 ℃～26 ℃,光照强度为5 000 lx,光周期10 h～12 h。 1.4 诱导培养 愈伤组织诱导：将初代培养获得的无菌叶片切成1.0 cm×1.0 cm,按叶面朝上,平放在初代培养基上进行愈伤组织诱导培养。培养时间为25 d～30 d,培养温度为24 ℃～26 ℃,避光培养。 愈伤组织分化：将愈伤组织切成1.0 cm×1.0 cm,接入愈伤组织分化培养基中。培养时间为25 d～30 d,培养温度为24 ℃～26 ℃,光照强度为2 000 lx,光周期10 h～12 h。 不定芽的增殖培养：将通过茎段获得的不定芽切成单芽,接入增殖培养基中,培养时间为20 d～25 d,培养温度为24 ℃～26 ℃,光照强度为2 000 lx,光周期12 h～15 h。 1.5 生根培养 切取生长健壮、叶片舒展的不定芽,接入生根培养基中,培养时间为15 d～25 d,培养温度为24 ℃～26 ℃,光照强度为1 000 lx,光周期10 h～12 h。 1.6 炼苗 根、茎、叶俱全,高3.0 cm～5.0 cm,叶片3～4片,根数5条以上,根长2.5 cm～4.0 cm。叶色正常,无微生物污染。将组培苗带瓶放置温室5 d～7 d,光照强度为5 000 lx～10 000 lx,温度为15 ℃～30 ℃,然后除去瓶盖继续放置1 d～2 d。 2、 组培苗移栽 2.1 基质 以泥炭、珍珠岩按体积比2:1配制。用0.3％～0.5％高锰酸钾溶液淋透消毒。 2.2 容器 50孔或72孔的育苗穴盘。 2.3 移栽 组培苗取出,洗去根部培养基,50％多菌灵可湿性粉剂1 000倍溶液浸泡10 min～15 min。每穴种植1株,基质以刚盖过组培苗基部为宜,浇透定根水。 2.4 移栽后管理 温度为20 ℃～25 ℃。相对湿度保持在60％～85％,保持基质湿润。移栽初期用遮光率为70％的遮阳网遮阴5 d～7 d。30 d后用复合肥（N-P2O5-K2O=15-15-15）1 000～2 000倍液淋施,每7 d施用1次。每7 d用75％百菌清可湿性粉剂1 000～1 500倍液或50％多菌灵可湿性粉剂800～1 000倍液药液喷雾预防病害。 3、质量要求 3.1 组培苗 健壮,株高5 cm～6 cm,叶片5～6枚,根数10条以上,根长4.0 cm～5.0 cm,无微生物污染。 3.2 穴盘苗 健壮,株高8 cm以上,叶片6枚以上,根系充满穴盘孔,无病虫害危害。 4、包装、标签和运输 按NY/T 2306的规定执行。 三、技术的创造性与先进性; 1、该技术完善了重瓣大岩桐种苗工厂化生产技术体系,对推动重瓣大岩桐的产业化、规模化发展,具有重要的的指导意义。 2、该技术具有繁殖速度快、繁殖系数大、繁殖周期短,繁殖后代整齐一致,移栽成活率高的优点。 3、该技术形成的地方标准的颁布填补了我区目前无重瓣大岩桐组培快繁生产技术规程的这一空白。 四、技术的成熟程度,适用范围和安全性; 该技术对重瓣大岩桐组培快繁技术进行了研究,包括组织培养方法、组培苗移栽、质量要求以及包装、标签和运输。该技术适用于广西境内重瓣大岩桐种苗的组培快繁,技术安全可靠。 五、应用情况及存在的问题;目前已在广西农科院花卉研究所得到了应用,并获得了大量的组培种苗。由于组培的设备设施要求高,一般的花卉种植户无法进行该类种苗的生产。 六、历年获奖情况; 无