[00141423]Fas 死亡结构域相关蛋白 DAXX 在卵巢癌化疗耐药中的作用及其分子机制研究

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤,其致死率在所有妇科癌症中居于第四位。成年女性的卵巢表面覆盖有一层扁平的卵巢上皮细胞（mouse ovarian surface epithelium,mOSE）。卵巢表面上皮细胞具有分泌激素和运输等功能。在排卵的过程中,女性卵巢表面出现周期性的破裂,mOSE细胞通过自我的复制可以修复这种周期性的损伤,在这个过程中mOSE细胞基因组的完整性就显得尤为重要。有研究表明,在羊排卵时,卵巢破裂处的mOSE细胞会发生DAN损伤。除此之外,化学试剂methoxychlor也可以导致mOSE细胞氧压力和DAN损伤。Valko等人也报道在大多数肿瘤都有DNA损伤发生,这说明早期基因组异常与恶性肿瘤的发生密切相关。 卵巢癌治疗以化疗为主,临床上常用的卵巢癌化疗药物大多数可以造成肿瘤细胞的DNA损伤,如顺铂、博来霉素、VP-16和阿霉素,从而导致肿瘤细胞的凋亡。卵巢癌患者对化疗药物的耐药性是卵巢癌治疗的关键问题。研究表明,临床常见的化疗药物不能诱导卵巢癌细胞发生凋亡是卵巢癌耐药的主要问题。原癌蛋白的异常表达（如FAS, caspases, 和 p53等）及凋亡相关蛋白的失活（如AKT,FLIP）可以引起肿瘤细胞的耐药。 DAXX最初是作为原癌蛋白与死亡域相关蛋白CD95受体相结合。通过激活c-Jun NH2-末端激酶增强CD95介导的生长因子β依赖性凋亡。有文献报道,RNA干扰沉默Daxx也可增加细胞凋亡,并且在小鼠中敲除Daxx基因可导致小鼠胚胎致死。这些都表明DAXX也可以具有抗凋亡的作用。除在凋亡和抗凋亡中的作用外,DAXX还可以与多种蛋白结合发挥转录沉默作用,如组蛋白去乙酰化酶HDAC1 , HDAC2,DNA甲基化酶DNMT1,同时DAXX也可作为转录抑制因子可抑制C/EBPβ, c-Met, Pax3, Ets1, p53, p73, p63, 糖皮质激素受体, 雄激素受体和SMAD4。 DAXX的转录调控功能与它的核定位密切相关。DAX与SUMO修饰的PML结合并共定位在亚细胞核结构,即PML癌基因结构域PODs。早幼粒细胞白血病蛋白PML核体结构（PML-NBs）存在于所有的哺乳细胞中,是细胞核内较大的核结构域。PML与细胞凋亡、转录调控和肿瘤抑制都有密切联系。有研究表明一些凋亡的调控因子定位在PML-NBs区域,在PML缺失的老鼠中出现凋亡异常的现象。DAXX和PML在卵巢表面上皮细胞和卵巢癌细胞中的作用还不清楚,这正是我们在本课题中要解决的问题。 第一部分,我们建立了过表达DAXX和敲除DAXX的mOSE细胞。我们发现DAXX敲除可增加mOSE细胞依赖p53/p21途径发生衰老,同时和PML共同参与mOSE细胞DNA损伤。 第二部分,我们发现DAXX在人卵巢上皮细胞癌中高表达,但是在人颗粒细胞癌中低表达。在体外培养的卵巢癌细胞中,DAXX和PML相互作用共定位于PML-NBs区域。我们对DAXX在卵巢癌细胞中增殖、迁移及化疗抵抗进行研究。在卵巢癌细胞中过表达DAXX可以促进细胞增殖、克隆形成和转移,而通过RNA干扰使Daxx缺失后可以降低卵巢癌细胞的增殖、克隆形成和转移能力。裸鼠的体内实验证明,给裸鼠注射DAXX过表达的卵巢癌细胞可以增强肿瘤形成能力,而RNA干扰Daxx后抑制肿瘤形成。更为重要的是, DAXX过表达可以诱导正常mOSE 细胞恶性转化。DAXX通过结合PML阻止X-RAY和化疗药物诱导的卵巢癌细胞发生DNA损伤。终上所述,这些结果表明DAXX可以促进卵巢癌细胞增殖和阻止卵巢癌细胞发生DAN损伤,是一个新的卵巢癌基因。因此,在临床上可以将DAXX和PML核体作为卵巢癌治疗的分子靶标。