[00141844]肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法

肺炎链球菌是诱发细菌性肺炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、中耳炎的重要病原菌,是发展中国家儿童细菌性肺炎最常见的病因。全球每年死于肺炎球菌感染者有100～200万。中国肺炎发病率一直很高,近50年来,肺炎球菌感染者中菌血症死亡率一直徘徊在25～29%之间。此外,肺炎也是导致60岁以上老人死亡的主要原因之一。由于肺炎链球菌耐药性强,疫苗成为预防肺炎链球菌引发的各类疾病的最有效手段。 1983年美国成功研制出23价肺炎多糖疫苗,但该疫苗在2岁以下婴幼儿中诱导的保护性低,无免疫应答。多糖结合疫苗的出现解决了2岁以下儿童的免疫问题。初步的临床试验结果表明,肺炎链球菌多糖结合疫苗在婴幼儿中的安全性和有效性良好,诱导产生的抗多糖抗体远高于多糖疫苗,并可诱导免疫记忆反应,所以肺炎链球菌多糖结合疫苗的研制具有重要的社会意义和价值。 多糖结合疫苗中的游离多糖含量超过规定的限度会对疫苗临床使用的效果产生不利的影响,因此多糖蛋白结合物中游离多糖含量测定是多糖结合疫苗质量控制中的关键指标之一,也是反映结合疫苗质量的优劣的主要指标之一。因为不同细菌多糖以及不同多糖结合物性质差异较大,所以多糖结合疫苗中的游离多糖测定是一个技术难点,目前尚无多糖结合物中游离多糖测定的通用方法。国外文献报道采用高效液相色谱法进行细菌多糖结合物中游离多糖测定,一种采用高效凝胶过滤,一种采用高效阴离子交换色谱。高效凝胶过滤法基于分子大小差异来区分结合多糖与游离多糖,易受到分子大小相近杂质的影响,测定结果误差较大;高效阴离子交换色谱基于分子带电荷性质的差异而区分结合多糖与游离多糖,也易受到与多糖带电荷性质相似的杂质的影响;此外,肺炎链球菌多糖在紫外区域没有强的光吸收,无法在配置紫外检测器的高效液相系统上测定肺炎链球菌多糖结合物的游离多糖含量。目前尚无采用乙醇沉淀法和磷含量测定法测定肺炎链球菌6B型、18C型、19F型和23F型多糖结合物中游离多糖含量的报道。 本发明的方法克服了现有方法无法准确测定肺炎链球菌多糖结合物游离多糖含量的不足,该方法可以准确、简单地测定肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物种中游离多糖的含量,从而评价制品质量。