[00142764]位点特异性基因修饰猪体系的构建

项目研究团队在2016/04到2018/03期间以研究位点特异性基因修饰猪体系的构建为重点和中心,完成了项目的研究内容,达到了项目的研究目标,并取得了一系列的研究成果：1)ROSA26定点整合双链RNA激活凋亡寡聚体（DRACO）基因修饰猪的制备; 2)猪Hipp11位点鉴定及新型Phi31整合酶介导的定点整合体系建立。 项目目前已经在被SCI收录的国际期刊上发表科研论文5篇,全部标注广州市科技计划项目-科学研究专项的经费支持。申请国内发明专利1项,申请国际PCT专利一项。 项目总经费20万元（广州市科信局拨付20万元）已经全部到位并全部使用。经费遵循国家、省市以及依托单位的经费管理办法,按照项目合同书中规定的具体经费预算使用。 在此基金的支持下,我们成功建立了基因位点特异性整合基因修饰猪体系。在此基础上我们构建了多种基因修饰猪模型!其中我们通过基因打靶技术,成功地将能够编辑基因的Cas9蛋白基因插入到猪ROSA26位点,相当于在猪体内加入了一把基因剪刀,并且在Cas9基因附近加上了能与Cre重组酶结合的loxp位点,后者相当于一个开关,能对其剪切功能的开启加以控制。研究人员利用此工具模型,不需要依赖受精卵注射或体细胞核移植技术,在动物体内转入能识别特定基因的gRNA和重组酶,就可直接对猪的基因组进行编辑,从而快速获得相应基因编辑猪模型。 我们将包装的含有Cre重组酶和靶向六种肿瘤相关基因的gRNAs慢病毒通过滴鼻方式,感染工具猪的肺脏,在猪肺细胞的基因组发生癌化突变。三个月后,猪出现了典型的肺癌症状和病理变化,从而成功地建立了原发性肺肿瘤大动物模型。 利用条件性表达Cas9基因猪模型,可高效的实现大动物体内细胞单基因、多基因、超大片段基因的编辑。这一研究成果将推动猪基因功能的研究进展和加快在生物医药及农业领域有重要应用价值的基因修饰猪模型的建立。 该成果引起了国内外科研人员和大众媒体的广泛关注。