[00142890]琥珀酸在点燃模型调节脑神作用的研究

中药琥珀甘淡性平，镇静安神，琥珀酸是其中主要有效成分，其化学结构类似牛磺酸。琥珀酸具有多种中枢抑制效应，如抗癫痫、抗惊厥、镇静、降温作用，对小鼠脂质过氧化和学习记忆也有有利的影响。其抗惊厥作用已被证实，但对慢性癫痫模型的作用研究未见报道。琥珀酸的化学结构与脑内调控癫痫的抑制性氨基酸神经递质GABA、牛磺酸和兴奋性神经递质谷氨酸相似，这种构效关系提示琥珀酸可能是一种脑内天然抗癫痫的内源性神经活性物质。该课题在多种癫痫点燃动物模型：戊四唑(PTZ, pentylenetetrazol)化学性点燃，杏仁核电刺激性点燃和海马快速点燃模型上研究琥珀酸抗癫痫作用及其机制。1. 在小鼠GABAA 亚型受体特异拮抗剂苦味毒惊厥实验中， 琥珀酸200~400mg·kg-1 ip 显著延长苦味毒惊厥小鼠的潜伏期（P <0.05）。在小鼠自主活动的实验中表明琥珀酸可抑制小鼠自主活动。2. 成功制备了大鼠PTZ 化学性点燃、杏仁核电刺激性点燃两种慢性癫痫模型和海马快速点燃模型。3. 琥珀酸100~400mg·kg-1 ip 可剂量依赖性抑制PTZ 化学性点燃发作，降低Ono’s 分级和Ono’s 6 级发作百分率（P<0.01）。4. 琥珀酸100~400mg·kg-1 ip 可剂量依赖性抑制阈刺激下大鼠杏仁核点燃发作，升高ADT，降低Racine’s 发作分级和Racine’sⅤ级发作百分率（P <0.01）。口服800 mg·kg-1 可缩短点燃大鼠ADD，降低Racine’s 分级。5. 琥珀酸200 和400mg·kg-1 ip 对大鼠海马快速点燃模型有抑制作用，降低ADD，提高5 级发作阈值。6. 测定了琥珀酸小鼠灌胃的急性毒性，LD50 值为7.52 g·kg-1，证明其毒性很低。7. 采用红外可视脑片全细胞膜片钳技术，在电压钳模式下记录到琥珀酸能显著增加海马CA1 区神经元自发微小抑制性突触后电流的频率，证明其能显著增强突触前GABA 能神经递质的自发性释放，起到抑制神经元异常放电的作用。8. 电压钳模式下，采用传统全细胞膜片钳和制霉菌素(nystatin)穿孔膜片钳记录到琥珀酸在海马CA1 区能显著性抑制高电压激活的钙通道电流，说明其通过抑制钙通道的开放而降低神经元的兴奋性，具有较强的神经元保护作用。结论：在小鼠GABAA 亚型受体特异拮抗剂苦味毒惊厥实验中，琥珀酸对小鼠惊厥发作有明显抑制作用，具有“调衡心神”作用。琥珀酸对大鼠杏仁核点燃、戊四唑化学性点燃和海马快速点燃的发作均有抑制作用，证明其具有抗癫痫，抗癫狂作用；琥珀酸能显著增强海马CA1 区神经元微小抑制性突触后电流，能显著性抑制高电压激活的钙通道电流，证明琥珀酸抗癫痫，抗癫狂作用是通过增加突触前GABA 能神经递质的自发性释放，从而增加抑制性突触传递作用及抑制钙通道的开放、减少钙内流来实现的。