[00142984]重组蚊浓核病毒介导的蚊特异性基因沉默及其杀虫效果研究

一、目的背景：蚊媒传染病仍然是世界性的公共卫生问题,生物防制是控制蚊媒传染病的发展方向之一。MDV是蚊类特有病毒,具有发展为生物杀虫剂的潜在价值,但野生病毒杀虫活性低,作用速度慢。目前,基因沉默技术已经在害虫防制上初获成功,但在应用于蚊虫却缺乏有效的转导系统。总体目标是：构建重组蚊浓核病毒介导的蚊特异性基因沉默转导系统,实验室内测试其介导的基因沉默对蚊虫的杀伤效果,为蚊类特异高效生物杀虫剂的研发奠定基础。 二、研究内容 ⑴以内含子内小RNA的表达策略,构建表达siRNA和artificial miRNA的非缺陷型重组MDV转导系统;⑵以蚊虫生长繁育关键基因为靶标,利用该系统实现蚊体内目的基因的沉默,实验室内测试其对蚊虫的杀伤效果。 三、重要结果、关键数据及其科学意义 在国自然资助下主要研究结果包括：1.成功构建了非缺陷型的可自我复制与包装的重组蚊浓核病毒;2.通过内含子内小RNA表达策略,成功利用重组病毒介导的在蚊细胞系C6/36细胞内与白纹伊蚊幼虫阶段过表达与抑制内源性蚊虫miRNA与人造artifical miRNA;3.系统测试了重组病毒在蚊体内外基因稳定性。4.利用白纹伊蚊与埃及伊蚊幼虫为载体,初步的测试了病毒大规模生产的新型方法。5选择蚊虫生长发育的关键基因之一作为靶基因,有效的降低了该种靶基因的表达水平,并增强了病毒对蚊虫的病原性,包括增加增加了病毒的死亡率,增强了亚致死效应,包括蚊虫的幼虫期、化蛹时间、羽化时间等。该蚊虫特异的小RNA重组病毒载体的成功构建,为蚊虫基因功能研究提供有力的武器,为蚊虫防制提供了新的策略。