[00143039]猪流感病毒先天性免疫反应机制及通用疫苗的基础研究

本项目采用现代分子生物学的方法,以猪流感病毒为模型,分析流感病毒引起的先天性免疫反应机制,寻找具有高效抗病毒功能及重要转基因育种价值的特异性和非特异性基因,为防控流感提供技术支持。本项目在本实验室已有的前期研究基础上,通过建立高效的siRNA干扰方法,下调细胞中p53的表达量,证实了p53蛋白在干扰素介导的先天性抗猪流感病毒中的作用。进一步通过Dual-Luciferase的方法检测了p53蛋白对含有干扰素刺激应答元件的报告基因表达的影响,在细胞水平上阐明了p53可以促进干扰素介导的抗猪流感病毒的能力。通过动物水平上证明了p53对于机体抵抗猪流感病毒感染的重要性。阐明了p53蛋白在干扰素介导的先天性抗猪流感病毒中的作用。为以p53蛋白为靶标分子的抗流感药物设计,对增加对流感病毒免疫应答的全面认知具有重要的意义。同时,我们从NCBI数据库中下载了所有甲型流感病毒的基因基因序列,通过对保守抗原位点进行筛选和鉴定,分别开展了H1亚型流感病毒通用疫苗的研究、M2e合成肽流感通用疫苗的研究和具有M2e及HA的共有序列的DNA疫苗研究。通过细胞水平及小鼠实验,评价了各类疫苗的免疫原性及异源攻毒保护效力。结果说明,三类疫苗均具有较强的异源保护效力,可以作为流感通用疫苗的候选。该部分研究结果为新型流感疫苗研究提供了理论支持和目标抗原的基因序列,为以调节宿主信号传导为目标的抗流感药物设计提供潜在的靶标分子,有助于研发具有我国自主知识产权的抗流感药物,也有助于新型通用疫苗的开发和研究。 通过本项目研究,取得了如下成果： 1、发现了流感病毒感染后p53-/-小鼠的死亡率、肺组织病理损伤程度、病毒载量明显高于p53+/+小鼠,证明了p53具有抗流感病毒的作用。 2、发现了流感病毒感染p53-/-小鼠肺脏和p53基因沉默细胞中IRF9、ISG15、ISG20、GBP-1、OAS-1、IRF7和RIG-1等干扰素信号通路中的抗病毒基因表达显著下调,干扰素介导的抗流感病毒能力下降;发现了p53可促进干扰素应答元件（ISRE）的转录激活,在调控Ⅰ型干扰素抗病毒反应中发挥作用。 3、系统地分析了H1N1猪流感病毒的膜蛋白（HA和M）的抗原位点,制备了H1亚型流感病毒通用疫苗、M2e（M2蛋白胞外区）合成肽流感通用疫苗和两组通用型DNA 疫苗,发现这些疫苗可以对同源和异源的甲型流感的攻击均具有明显的保护效力。 4、发表学术论文18篇,其中5篇为SCI论文,申报国家发明专利3项,培养博士研究生3名,硕士研究生2名。