[00143534]人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其在冠心病、再狭窄基因治疗中的应用

冠心病成为威胁人类健康和生命的头号杀手,尽管冠脉介入治疗和外科搭桥术有了长足的进步,但术后再狭窄（RS）、高额医疗费用、需要特殊设备以及创伤大等弊端一直限制其广泛开展,尤其重要的是对于多支弥漫病变患者这些方法均无能为力。基因治疗可能成为最终攻克冠心病和再狭窄的根本措施。血管内皮生长因子（VEGF）是1989年发现的特异性的促内皮增生、促血管生成、增进内皮功能和存活的细胞因子,在多种疾病的基因治疗中具有广阔的前景。 本研究构建VEGF165基因的真核表达质粒,并将其应用于冠心病、再狭窄的基因治疗。本研究首先采用现代分子生物学技术克隆人VEGF165基因真核表达质粒pAdtrackCMV-VEGF165,体外转染293细胞,鉴定表达蛋白具有生物学活性,活体转染兔并获有效表达。在此基础上建立动脉粥样硬化兔再狭窄动物模型,采用多聚赖氨酸、脂质体介导球囊导管实现基因局部转染再狭窄部位,从内皮修复、内皮功能、平滑肌细胞增殖迁移、表型改变、细胞外基质代谢、血管病理性重塑等多环节评价转染VEGF基因对RS的防治作用,得出结论再狭窄是多因素多环节共同作用的结果,转VEGF165基因可能通过促进内皮修复,增进内皮功能和存活,抑制平滑肌细胞增殖转型,调节细胞外基质代谢,促进适应性重塑,从多环节阻止再狭窄发生。冠心病基因治疗的关键是实现基因靶向转移至真正需要血运重建的缺血区域,也是制约其临床应用的难点,本研究将冠状静脉窦逆行灌注技术（RCSP）及介入技术巧妙结合,很好地实现VEGF基因（蛋白）的靶向转移,确保在需要血运重建的缺血区域充分发挥作用,VEGF通过改善内皮功能,减少心肌梗死面积,改善左室功能,调节基质金属蛋白酶及其组织因子表达,改善心室重塑,促进新生血管形成,提高缺血心肌的心电稳定性。 创造性与先进性：1.本研究率先在国内建立人VEGF165基因真核表达质粒。2.创造性地将分子生物学技术与介入技术及心肌保护措施巧妙结合实现基因靶向转移。3.首次提出再狭窄的机制是多因素多环节共同用的结果,VEGF基因可通过促进内皮功能和修复、抑制平滑肌细胞增殖迁移、调节细胞外基质代谢,促进适应性重塑等方面抑制再狭窄发生。4.首次探讨转VEGF基因治疗心肌梗死的作用和机制,并从心肌细胞膜L型钙电流改变探讨非抗心律失常药物减少严重心律失常发生的可能机制。5.首次探讨VEGF对基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响,得出VEGF对血管和心脏重塑的影响与此有关。