[00143559]SH-RNA-DKK1调控BMSC成脂、成骨分化的实验研究

本项目进一步探讨和证实了糖皮质激素所致的骨质疏松的机理之一是通过上调Dkk-1表达从而抑制Wnt的经典通路来实现的。通过对DDK1表达缺失后BMSCs成骨－成脂分化过程中关键转录因子和特异性功能基因的表达进行检测,探索DDK1调控BMSCs成脂－成骨分化转录水平的分子机制。 目前通过本实验研究结果,初步得出以下结论： 1、DKK1在骨髓间充质干细胞成脂分化早发挥重要调节作用,sh-DKK1明显抑制骨髓间充质干细胞成脂分化。 2、sh-DKK1促进成骨蛋白表达,DKK1在骨髓间充质干细胞成骨分化早期可能通过调节成骨相关蛋白而发挥作用。 本研究阐明了糖皮质激素所致的骨质疏松的机理之一是通过上调Dkk-1表达从而抑制Wnt的经典通路来实现的,阐明了BMSCs向特定谱系分化的关键信号和分子通路,为指导临床通过某种方法靶向阻断骨组织中Dkk-1的表达,而促进Wnt经典信号通路来促进BMSCs的成骨分化,抑制其成脂分化;并部分逆转糖皮质激素对成骨细胞的抑制作用,促进成骨细胞殖和分化,而达到治疗激素性骨质疏松的目的,同时为其他骨量丢失疾病的临床治疗提供了理论依据。 本课题的先进性：在于运用先进real-time-PCR技术western blot蛋白定量技术,si-RNA技术从分子水平探讨并证实糖皮质激素所致的骨质疏松的机理之一是通过上调Dkk-1表达从而抑制Wnt的经典通路来实现的。 本课题技术要点：本课题为基础理论研究,关键要点有： 1、探讨证实了DKK1是成骨－成脂分化过程中关键调控因子。 2、通过DKK1干扰探讨DKK1在骨髓间充质干细胞早期成骨、成脂分化的调节作用及分子机制。 包头市科技局鉴定委员会听取了课题组工作总结、技术研究汇报,审阅了相关材料,并经质疑、答辩, 形成如下鉴定意见： 1、课题组提供的鉴定资料完整、完成了“任务书”要求的各项内容,数据详实、可靠,统计分析方法应 用正确,符合鉴定要求。 2、本实验通过对DKK1表达缺失后BMSC成骨－成脂分化过程中关键转录因子和特异性功能基因的表达进行检测,探索DKK1调控BMSCs成脂、成骨分化转录水平的分子机制,为将来阐明BMSCs向特定谱系分化的关键信号和分子通路,为骨质疏松症及其他骨量丢失疾病的临床治疗提供理论依据。课题设计新颖、独特,思路严谨,技术路线合理,具有科学性、先进性、创新性。 3、创新点： （1）研究激素对鼠BMSC中Dkk1表达以及经典Wnt信号通路活性的影响。 （2）应用siRNA技 术在体内靶向Dkk-1基因,稳定抑制该基因的表达,并分析该基因DKK1表达缺失后对BMSC骨－成脂平衡的影响,从抑制BMSC成脂分化促进其成骨分化的角度,以确定其在防治临床骨质疏松中的作用。 4、该课题达到国内领先水平。