[00143683]脐血来源CD4＋CD25＋调节性T细胞治疗反复性流产的实验研究

在妇产科临床中针对同种免疫异常所致的RSA患者,采用父方或无关第三方个体外周血分离得到的淋巴细胞进行主动免疫治疗,通过致敏反应促使患者产生个体特异性因子,提高患者的免疫反应性,防止了胚胎或胎儿父系抗原被母体免疫系统识别和杀伤。虽然主动免疫治疗能提高封闭抗体阴性所致复发性流产患者的妊娠率,但由于RSA发病因素极其复杂所以在临床实践中这种传统的治疗方式也存在局限性。越来越多的证据表明,RSA患者体内调节T细胞数量和功能明显下降,使得Th1型免疫应答过强和Th2型免疫应答不足,从而导致流产的发生。因此,通过人为补充体内调节T细胞有可能成为治疗RSA的一条新策略。 在胸腺中,原始的T淋巴细胞能分化成三种类型的细胞,分别为细胞毒性T细胞（Tc细胞）、辅助性T细胞（Th细胞）和调节性T细胞（Treg细胞）。它们各自具有不同的功能,见图1所示。近年来很多学者认为CD4＋CD25＋调节性T细胞是一种能产生明显免疫抑制作用的相对独立的T细胞亚群,是人类执行外周免疫耐受功能的主导细胞,在维持母胎免疫耐受中起到重要作用。CD4＋CD25＋调节性T细胞最早Sakaguchi在1995年发现[12],是具有免疫负性调节功能的一类CD4+T辅助细胞,其表面特征性地表达IL-2 受体分子（Interleukin 2 receptor,即CD25）,2001年被正式命名为调节性T细胞。它的作用具体为通过细胞间接触抑制及分泌抑制性细胞因子等途径发挥抗炎和维持自身免疫耐受,发挥免疫负调节的作用。目前,从成人的外周血中获得调节性T细胞的比例较低,占1-2%,这大大阻碍了临床上调节性T细胞用于免疫治疗。相反,从脐血中可以获得较大比例的CD4＋CD25＋调节性T细胞亚群。而且所得细胞处于相对原始状态,而且不容易被体外刺激变成效应T细胞,这就为临床的应用研究提供了极大的方便。 本课题从小鼠的脐血中分离并筛选CD4＋CD25＋调节性T细胞。鉴定调节T细胞的表型和特有的FoxP3基因表达,并在体外细胞层面上验证其对效应T细胞和NK细胞的免疫抑制功能。接着以CBA/J雌鼠×DBA/2J雄鼠作为反复性流产的实验模型,采用分离得到的CD4＋CD25＋调节T细胞和分离自能正常生育的BALB/c雄鼠外周血单核淋巴细胞对反复性流产的孕鼠进行免疫治疗,检测两种不同的免疫治疗前后调节T细胞在脾脏单核细胞比例的变化和FoxP3基因的表达。并且通过使用上述两种不同的细胞进行三组不同的尾静脉免疫治疗注射,进而比较两种不同的免疫注射对反复性流产的治疗或改善效果,以期为妇产科临床治疗反复性流产提供新的治疗思路和手段。