[00144073]地黄缓解肾纤维化的作用及其机制研究

1、课题来源与背景 《地黄缓解肾纤维化的作用及其机制研究》为2013年重庆市卫生局批准立项的中医药科研项目,批准号：ZY20132154,项目总经费为8.0万元,其中重庆市卫生局拨款4.0万元,单位自筹4.0万元。 肾纤维化是各种慢性肾脏疾病发展的共同通路,Wnt/β-catenin是肾间质纤维化过程的重要信号通路,而β-catenin是Wnt/β-catenin信号通路的关键调控因子。本课题采用单侧输尿管结扎造成小管间质性肾纤维化（UUO）大鼠模型,对比研究生地、熟地对大鼠肾纤维化的缓解作用,并通过考察对TGF-β1、α-SMA、β-catenin和Collagen-Ⅰ蛋白水平的影响,初步探讨地黄缓解肾纤维化的分子生物学机制。有助于阐明地黄缓解肾纤维化的作用及其可能机制,为临床应用地黄治疗肾纤维化提供实验依据。 2、技术原理及性能指标 采用单侧输尿管结扎方法复制了大鼠小管间质性肾纤维化模型（UUO）,设置生地水提物高、中、低剂量组,熟地水提物高、中、低剂量组,UUO模型组和假手术组,每组5只实验动物。灌胃给药14 d后：1)收集血清,采用全自动生化仪测定了血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;2)取大鼠左肾,去除包膜,常规石蜡包埋、切片。采用HE染色观察皮质、髓质的蛋白管型和肾小管扩张、炎症细胞浸润、间质纤维化程度等情况,Masson染色观察胶原纤维分布情况;对比研究生地、熟地水提物对UUO大鼠模型肾纤维化的缓解作用;3)通过Western blot检测肾脏组织中TGF-β1、α-SMA、β-catenin和Collagen-Ⅰ蛋白表达。以上研究明确了生地、熟地水提物对肾间质肾纤维化的缓解作用和对TGF-β1、β-catenin、α-SMA、Collagen-Ⅰ蛋白的调控作用,初步探讨了地黄缓解肾纤维化的分子生物学机制,为地黄生熟异用以及临床应用地黄汤为基础方治疗肾纤维化提供了相关实验依据。 3、技术的创造性与先进性 国内外关于地黄及其提取物改善肾纤维化及肾保护作用已有报道,但生地、熟地缓解肾纤维化作用是否有差异及其分子机制如何,尚未完全阐明;基于Wnt/β-catenin信号通路研究地黄缓解肾纤维化的分子机制,国内外尚无报道。 本项目以UUO大鼠模型为研究对象,选择与肾纤维化密切相关的TGF-β1、β-catenin、α-SMA、Collagen-Ⅰ蛋白为突破口和切入点,通过整体动物实验研究,阐明生地、熟地的缓解肾纤维化作用及可能分子机制。 4、技术的成熟程度,适用范围和安全性 顼目采用的研究技术成熟,研究结果为地黄生熟异用以及临床应用地黄汤为基础方治疗肾纤维化提供了实验依据。 5、应用情况及存在的问题 在本项目研究基础上,课题组对地黄缓解肾纤维化的分子机制进行深入研究,已获得国家自然科学基金（81603611）,重庆市科委基础与前沿项目（cstc2014jcyjA10025）的资助。但应用研究方面有待进一步加强。 6、历年获奖情况 无