[00144205]Anti-CD20mb上调IL-17分泌促进DLBCL肿瘤生长的机制研究

1.课题来源与背景 虽然R-CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的患者获得高的缓解率和长期生存,但是有相当一部分患者产生耐药和复发,尤其对CD20mb的耐药,探讨耐药机制为DLBCL治疗新策略的设置有着重大的研究意义。 2、研究目的与意义 （1）阐明Rituximab上调DLBCL患者外周血Th17细胞及IL-17的分泌,以及促进Foxp+Treg分泌IL-17（2）明确Anti-CD20mb在治疗DLBCL的同时,由于促进IL-17分泌,刺激肿瘤的生长,产生双重效应。 3.主要论点与论据 （1） 阐明Th17/Treg细胞平衡与DLBCL发病的关系 通过流式细胞术检测初治DLBCL患者外周血中Th17（CD4+IL-17+）和Treg（CD4+CD25+Foxp3+Treg）和IL-17+Treg细胞百分比,并与正常对照组比较。通过ELISA法检测DLBCL患者外周血血清中IL-17、INF-γ、TGF-β和IL-6浓度,并与正常对照组进行比较。（2）阐明Rituximab在DLBCL治疗中对患者外周血Th17、Treg和IL-17+Foxp3+Treg的影响 通过R-CHOP 和CHOP两组治疗方案治疗BLBCL患者,治疗4个疗程后,评估疗效,对完全缓解（CR）及非完全缓解（N-CR）组,检测治疗前后的上述细胞亚群及细胞因子浓度,并进行组内和组间比较。（3）体外实验进一步阐明B淋巴瘤细胞治疗中Rituximab对Th17、Treg和IL-17+Foxp3+Treg影响。 选择肿瘤细胞株选择生发中心（GCB）的DLBCL细胞株SUDHL-4。 分离正常对照组的外周血单个核细胞（PBMNCs）,分组培养,DLBCL 肿瘤细胞选用GCB 的SUDHL-4 细胞株。A 组：PBMNCs;B 组：Rituximab+PBMNCs;C组：Rituximab+ PBMNCs+IL-2;D 组：SUDHL-4 细胞+ PBMNCs;E 组：SUDHL-4细胞+PBMNCs+ Rituximab;F 组：SUDHL-4 细胞+ PBMNCs+ Rituximab+IL-2细胞培养后收集细胞和培养上清液,分别采用流式细胞术和ELISA法检测上述细胞亚群及细胞因子。（4）动物实验研究Anti-CD20mb对荷淋巴瘤细胞株小鼠Th17、Treg细胞、IL-17+Foxp3+Treg细胞及IL-17的影响 C57BL/6小鼠接种淋巴瘤细胞后,采用鼠抗人-CD20mAb和同型对照抗体分组处理小鼠,在不同的时间点,留取尾静脉血、处死小鼠取脾脏,分别采用上述方法检测血液、脾脏Th17、Treg、IL-17+Foxp3+Treg,血液中IIL-17、INF-γ、TGF-β和IL-6浓度。（5）IL-17对肿瘤细胞株体内和体外的增殖和细胞转化的影响 细胞采用不同浓度的IL-17培养48h,采用MTT法检测细胞的增殖。（6）进行了人骨髓来源的MSC通过体外培养和小鼠模型研究,人骨髓来源的间充质干细胞（hBMMSCs）通过分泌IL-6促进TME中IL-17的上调,并通过IL-17处理SUDHL-2细胞,发现通过激活JAK2/STAT3通路或者通过PI3K/Akt信号上调CyclinD2,与IL-17协同促进肿瘤的生长。 研究发现DLBCL肿瘤组织中IRF8表达抑制Th17细胞分化,升高的IL-17水平通过抑制p53表达促进DLBCL肿瘤的生长,预示预后不良。 4、创见与创新 发现作为DLBCL一线治疗方案CD20mb耐药的机制,在杀伤肿瘤细胞的同时,引起肿瘤微环境的变化--IL-17分泌上调促进了肿瘤的生长的机制。 5.社会经济效益 存在的问题虽然本项目部直接产生经济效益,但是通过该项目的研究成果,为将来克服DLBCL对CD20mb耐药性,增加敏感性的治疗策略通过理论依据和方向。项目的本事不直接产生经济效益,但是产生较好的社会效益,提高疗效和患者的生存和生存质量。通过本研究的发现,为今后地西他滨等联合CD20mb治疗DLBCL打下基础,并将进一步开展临床试验。 6、历年获奖情况 发表SCI收录论文5篇,2017年欧洲血液病年会作为壁报交流论文1篇,培养博士研究生1名,硕士研究生2名,相关的研究成果分别活得广州市医学会和广州市第一人民医院科技人才的优秀论文奖励。 7、成果简介要向社会公开,请不要填写商业秘密内容 研究成果通过发表论文及学术会议交流向社会公开。