[00144554]猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测试剂盒的研发

1、课题来源与背景： 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS,Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome）又称猪蓝耳病,主要引起怀孕母猪后期流产、早产、产死胎和木乃伊胎增多,仔猪出现呼吸道症状和断奶前死亡率增高,成年猪出现免疫机能障碍。该病于1987年在美国的北卡罗来纳州首先被发现,此后,在加拿大、日本、德国、荷兰、西班牙、法国、英国、比利时、匈牙利、丹麦、韩国等国家都有该病发生和流行的报道。1995年在我国北京郊区首次暴发了PRRS,郭宝清等于1996年首次从我国疑似PRRS病猪中分离到PRRSV,从而证实了该病毒在我国的存在。2006年夏秋季节,我国南方部分地区发生原因不明生猪疫情,农业部迅速组织有关专家进行联合攻关,对猪“高热病”病因进行调查分析。最终确定变异猪蓝耳病病毒是猪“高热病”主要病原,并定名为高致病性猪蓝耳病,该病可通过空气传播,不传染人,世界动物卫生组织将其列为法定报告动物疫病,我国列为二类动物疫病。到目前为止,此病己遍及世界上所有的养猪国家,给养猪业带来了巨大的经济损失,已成为阻碍当前养猪业健康发展的主要原因之一。 目前预防高致病性猪蓝耳病的疫苗可分为猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXAl株）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）。但为了有效的防治猪繁殖与呼吸综合征,减少免疫接种产生的应激与免疫失败的干扰,养殖户需定期进行免疫抗体的监测,抗体水平不合格时,应尽快实施一次加强免疫。 2、技术原理及性能指标： 项目计划在前期研究的基础上,采用 ELISA 方法检测动物血清中的中和抗体,评价动物疫苗的免疫接种效果。将分别在安徽省各动物疫病防控中心进行临床应用,参比美国 IDEXX 公司进口诊断试剂盒检测结果评价本项目研制试剂盒抗体水平普查性能,参比中国兽药典规定的中和试验方法评价本项目研制试剂盒中和抗体检测性能,完成后向国家农业部申报注册文号和生产批件。 3、技术的创造性与先进性： （1）项目产品创造性的采用重组抗原池制备 ELISA 检测试剂盒,突破了传统 ELISA 检测试剂盒不能评价中和抗体水平的问题,研制出既能满足抗体水平普查又能满足疫苗免疫效果评价的 ELISA 检测试剂盒。 （2）项目产品简便、快捷、准确,达到国际先进水平并适合我国国情的动物疫病疫苗免疫效果快速检测试剂。 （3）项目产品将打破国外试剂公司对我国兽用诊断试剂市场的垄断,促进我们兽用诊断试剂行业的快速发展,并为有效防控动物疫病提供有力的保障。 4、技术的成熟程度,适用范围和安全性： 本公司研发部成员拥有人体外诊断试剂研发成功经验。早在 1996 年就陆续制备出单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒和风疹病毒等单克隆抗体和酶标二抗,并试验成功供用于临床诊断检测用 ELISA 试剂盒,获得了国家发明专利 2 项（专利号：200510037663.1、201010137779.3）。这些试剂盒曾通过了临床验证和卫生部中检所质量检测。近年来,为配合公司重组兽用干扰素 α 新生物制品临床实验疗效验证中,公司研发部已建立了常见动物疫病诊断平台,制备出系列常见畜禽传染病病原体抗原：猪繁殖与呼吸综合征病毒和单克隆抗体。该项目产品安全性能良好,不会产生任何毒副反应。 5、应用情况及存在的问题： 目前该项目研发相关工作已经完成,已经取得农业部转基因生物安全中间试验批文（农基安办报告字【2019】第066号）,由于报证时间较长,所以导致该项目的应用受限制。 6、成果简介： （1）将生产出来的ELISA检测试剂盒委托安徽医科大学临床病毒研究所进行质量检测,检验报告显示,该试剂盒的各项性能指标均符合要求,且不低于同类产品。 （2）申报2项发明专利,均已进入实审。专利号为：201810751155.7、201810752119.2。 （3）投稿3篇SCI期刊论文,其中2篇已发表,1篇正在审稿。考虑研究成果较为新颖,因此直接投稿SCI论文,未发表国内期刊。 （4）项目实施计划中是进行产品农业部注册,但根据《动物用转基因微生物安全评价指南》的要求,利用基因工程技术改变基因组构成,在农业生产或农产品加工中用于动物的重组微生物及其产品,需要进行安全评价。本项目产品属于其中的“基因工程抗原与诊断试剂盒”这一类别,因此,本项目先进行转基因生物安全中间试验申报,对重组猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原及其抗体ELISA检测试剂盒进行安全评价,并已获得中间试验批件。