[00145092]羊口疮病毒B2L蛋白类磷脂酶-D活性分析和分子特征研究

目前,ORFV-B2L 的功能备受国内外学者的关注,尤其是病毒感染在细胞内 复制、装配、扩散等过程中 B2L 所发挥的作用。我们通过 ORFV 囊膜蛋白 B2L 的表达与纯化,并于体外鉴定其生物活性及单抗的特异性结合特性。针对 B2L 蛋白氨基酸序列测序,同国内外不同分离株进行遗传学分析比较,进而采用同源 建模方式和 CRISPR/Case9 基因编辑技术研究 B2L 的类磷脂酶-D（PLD）的生物 活性中心结构,确定其“活性中心”基序和辅助元件,以揭示其基因结构蕴含的 分子特征。研究在设计思路、研究内容和方法应用方面均有所创新和突破。 首先,在思路设计方面,按照基因与功能密切关系的遗传学规律,以同亚科 的痘苗病毒 F13L 基因功能为参考,设计 ORFV-B2L 基因的研究思路。 其次,在研究内容上,针对 B2L 发挥怎样的磷脂酶-D 活性,通过 ORFV-B2L 基因编辑,获得重组病毒,并通过其细胞内外生物学特性的验证,以阐明病毒编 码该基因的科学性和必要性;研究 B2L 发挥磷脂酶-D 生物学活性的物质基础, 即“活性中心”构成,及其与痘病毒同系物之间的差异性。 第三,在研究方法上,首次采用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术,针对 B2L 基 因敲除,结合单细胞克隆、共聚焦电镜、免疫学及生物信息学技术,获得 ORFV-B2L 突变株。继而,编辑“活性中心”位点及其辅助元件,以明确其相 应的基因构成。按照任务书“预期研究的成果和水平”规定的内容提供相应附件。 1.论文（提供论文全文复印件,论文均应标注计划名称和项目编 号）,论著提交封面、版权页、目录。 2.检索报告（SCI、EI 等收录的论文提供检索证明） 3.知识产权（提供证书或受理书复印件）。发表SCI论文2篇;国家级核心期刊论文1篇。专著1部;发明专利2项。发表SCI论文2篇;国家级核心期刊论文1篇。专著1部;发明专利2项。