[00147299]应用生物反应器工业化生产猪蓝耳病疫苗的方法

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive andRespiratorySyndrome,PRRS）,又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度接触性传染病,对养猪业危害很大。我国已将高致病性猪蓝耳病列为一类传染病,疫苗免疫是目前防制该病的最根本有效措施。目前猪蓝耳病疫苗的生产是采用传统的转瓶工艺,即猪蓝耳病病毒接种已形成单层的细胞,培养后一次性收获病毒液。但是每个转瓶均是独立的细胞培养单元,每瓶细胞的质量、病毒产量和滴度都不同,导致疫苗批间差异大,而且操作劳动强度大,生产效率低,隐性污染引起的高内毒素等缺点,已经越来越不适应当前疫苗大规模生产的要求。本研究为了克服猪蓝耳病疫苗现有生产工艺的缺陷,提供了一种应用生物反应器工业化生产猪蓝耳病疫苗的方法,其优点是设备占地面积小、生产规模大;培养速度快、生产效率高;生产机械化,易于自动控制;培养设备密闭,不易污染;副产物少,疫苗的副反应小;生产的病毒液效价高,与传统的转瓶工艺相比,收获的病毒液滴度提高了0.5～1.5个LogTCID50/ml,疫苗质量稳定。 利用生物反应器微载体技术,建立细胞大规模悬浮培养技术平台,并在此基础上开展猪高致病性蓝耳病毒悬浮培养工艺研究,通过优化细胞培养参数（温度、溶氧、搅拌、通气、培养模式）及培养基配方,显著提高病毒培养滴度及动物疫苗质量,定型生物反应器大规模培养病毒生产工艺。 性能指标： （1）生物反应器培养体积规模达到40L; （2）细胞培养基国产化,细胞生长液和维持液中新生牛血清含量分别为5～8%和1～2%; （3）病毒培养滴度高于转瓶培养的0.5～1.5个滴度。 1.采用微载体悬浮培养技术,显著提高细胞密度; 2.采用生物反应器培养,其优点是设备占地面积小、生产规模大;培养速度快、生产效率高;生产机械化,易于自动控制;培养设备密闭,不易污染;副产物少,疫苗的副反应小;生产的病毒液效价高,与传统的转瓶工艺相比,收获的病毒液滴度提高了0.5～1.5个LogTCID50/ml,疫苗质量稳定。 成熟程度： 项目已经进行了多个批次的中试生产,培养体积达到40L的规模;从培养的病毒含量来说,每一批培养的病毒含量不低于8.4LgTCID50/ml,平均比转瓶培养提高一个滴度,而且培养效果稳定,批间差异小。因此该培养技术已经达到成熟的程度。 适用范围：该技术可以用于蓝耳病活疫苗和蓝耳病灭活疫苗的大规模生产。 安全性：生产中所使用的设备、仪器均通过安全认证,技术人员均是通过上岗培训,均有熟练的操作技能。生物安全方面,我公司多能来一直从事生物制品的研究开发工作,制定了严格的生物安全管理制度,实验室和生产车间的完全符合国家生物安全管理的要求。 该技术的全面应用需要大规模的生物反应器,价格昂贵,项目的前期建设需要大量的财力,因此目前该技术的应用还处于中试生产阶段。