[00148433]宿主调控病毒复制-2

(二) 研究T细胞、NK细胞免疫在控制流感等重要病毒感染中的作用机制： 1. 阐明在流感病毒感染过程中,活化的NK细胞可以在胸腺聚集,通过分泌IFN- 影响胸腺T细胞的增殖和凋亡,从而在流感病毒感染的一个重要病理反应-胸腺萎缩中起到重要的作用。（J Gen Virol., 2015） 2. 对流感病毒感染早期的有效控制是决定病情发展的关键因素,NK细胞在控制流感病毒早期感染中发挥重要作用。本课题组研究发现,相对于B6小鼠,129小鼠中NK细胞及多种细胞因子在流感病毒感染早期被快速活化,从而有效控制流感病毒早期复制及肺部炎症反应。进一步研究显示RIG-I和TLR9等信号通路的早期活化,以及NK细胞的快速迁移是造成129小鼠中NK细胞快速活化的重要原因。本研究阐明NK细胞免疫应答受到宿主遗传背景和感染剂量的影响, NK细胞反应的强度和动力学与NK细胞在抗病毒感染中起到的作用密切相关。（J Immunol., 2016） 3. 我们分析了流感病毒NS1蛋白引起宿主细胞骨架及迁移变化可能的内在机制,已经找到Rac1蛋白为NS1信号通路中的关键蛋白,Rac1活性的下调是引发上述实验结果的原因。目前实验中我们发现NS1蛋白能够与Rac1蛋白进行直接的相互作用,并通过蛋白后修饰手段来下调Rac1蛋白的活性,从而帮助病毒的复制。（Scientific Rep., 2016） 4. 我们在研究中发现,在流感病毒感染后,老年小鼠的NK细胞不能正常的向引流淋巴结迁移。我们阐明,NK细胞的这一障碍不但与外界环境有关,同时也是NK细胞内源性的。我们发现流感病毒感染后,老年NK细胞向引流淋巴结迁移的关键表面分子CXCR3的表达量并没有下调,而是引流淋巴结中CXCR3的配体CXCL9-11的分泌发生障碍。同时,老年小鼠的NK细胞无法上调 2整合素、以及 肌动蛋白。同时,在 肌动蛋白的聚集能力上也较年轻小鼠缓慢。（Exp Gerontol., 2017） 5. 我们通过小鼠感染模型阐明,在寨卡病毒（ZIKV）感染过程中,NK细胞被活化,上调IFN-g和颗粒酶B的表达,同时上调多种表面的活化受体。我们还证明,这些活化的NK细胞在感染的早期发挥一定的保护作用。（Sci Bull., 2017） 6. M1在A型和B型流感病毒中高度保守,是设计抗流感新药的理想靶点。理解宿主蛋白与M1互作的机制,对开发新药有重要意义。我们提取C57L/B6小鼠的肺部组织的RNA,反转后构建酵母双杂交文库。通过yeast mating的方法筛选M1的互作蛋白。筛选到的一个互作蛋白,我们暂时称之为MIP1。我们通过荧光能量共振转移（fluorescence resonance energy transfer, FRET）技术确认两者的互作。通过构建M1的不同截短体,我们确认M1的N端170个氨基酸是与MIP1互作的区域,其中N端的20个氨基酸是互作所必需的。前人的研究表明MIP1在真核生物DNA复制起始过程中发挥重要作用。我们推测M1通过与MIP1互作,影响宿主DNA的复制,从而利于病毒本身的复制。我们利用慢病毒载体构建稳定表达M1的A549细胞系,发现表达M1后,A549细胞进入S期受阻,停滞在G0/G1期。流感感染会造成细胞周期停滞在G0/G1期,我们发现过表达MIP1能部分挽救流感感染引起的细胞周期停滞现象。